Том 55, № 5 (2010)

Обеспечение исследований коллекционными культурами патогенов должно гарантировать адекватность свойств музейных материалов характеристикам их природных прототипов. Стандартность изготовления коллекционных культур по режимам, оптимальным для сохранения исходных свойств природной популяции возбудителя, обеспечивает при прочих равных условиях сопоставимость результатов исследований вне зависимости от места и времени их проведения, т. е. их преемственность. Сохранение в лабораторных условиях исходных биологических свойств микроорганизмов возможно при проведении минимального количества обогатительных и восстановительных пассажей культур с использованием биологических объектов, минимально воздействующих на гено- и фенотип конкретных культур штаммов. Основной критерий пригодности конкретной биологической системы для выделения и поддержания в дальнейшем данного возбудителя - стабильность маркерных характеристик агента при последовательных пассажах в этой системе. Проблемными направлениями для создания единой федеральной коллекции микроорганизмов являются унификация подходов к идентификации хранящихся и поступающих возбудителей, стандартизация принципов выделения, паспортизации и длительного сохранения исходных биологических свойств эталонных культур штаммов, а также создание системы межведомственного информационного обеспечения коллекционных работ.

В наших прошлых исследованиях было показано, что аминокислотные замены в гемагглютинине (HA) эскейп-мутантов вируса гриппа подтипа H5N1, обеспечивающие резистентность к моноклональным антителам, в некоторых случаях коррелируют со снижением вирулентности вируса для мышей. Вирулентность восстанавливается при серийном пассировании вируса. В настоящей работе мутации, соответствующие изменениям в гене HA низковирулентного эскейп-мутанта и его реадаптированного варианта, были введены в ген HA посредством сайт-специфического мутагенеза. С помощью плазмидной трансфекции были получены вирусы, содержащие либо HA вируса A/Vietnam/1203/2004 (H5N1) с делецией сайта нарезания, либо HA низковирулентного мутанта, либо HA реадаптированного варианта, а также 6 генов вируса A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) и NA вируса A/Vietnam/1203/2004 (H5N1). Определение вирулентности для мышей показало, что аминокислотная замена в HA низковирулентного эскейп-мутанта приводит к снижению вирулентности вируса для мышей. Введение дополнительной мутации, соответствующей аминокислотной замене в HA реадаптированного варианта, полностью восстанавливает вирулентность. Полученные данные являются первым строгим доказательством снижения вирулентности вируса подтипа H5N1 в результате аминокислотной замены, изменяющей антигенную специфичность HA, и восстановления вирулентности вследствие компенсирующей мутации в гене HA.

Представлены данные изучения генетического полиморфизма гена pol, кодирующего вирусную интегразу (ИН), популяции ВИЧ-1 субтипа А, циркулирующей на территории Липецкой области. В работе исследовали 32 образца вируса субтипа А, полученных за период 2002-2007 гг. Полиморфизм в кодонах, связанных с формированием устойчивости ИН к химиопрепаратам, наблюдали у 7 вариантов вируса. У 6 пациентов исследуемой популяции обнаруженные замены имеют характер генетического полиморфизма и не связаны с устойчивостью. При этом только у 1 (3,1%) варианта вируса выявлена минорная мутация устойчивости к RAL, в то время как аналогичные мутации в популяции субтипа G составляют около 10%.

В работе дана молекулярная характеристика образцов гена LMP1 вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ), амплифицированных из опухолевой и нормальной ткани больных с ВЭБ-негативными формами рака желудка (РЖВЭБ-). Генетическую структуру этих образцов, определяемых с помощью сиквенсного анализа, сравнивали с таковой образцов гена, выделенных из клеток ротоглоточных смывов тех же больных РЖ, а также лимфоцитов периферической крови больных инфекционным мононуклеозом (ИМ) и доноров крови. Полученные данные свидетельствуют о более высокой степени дивергентности образцов LMP1 из опухолевой ткани больных РЖ по сравнению с образцами больных ИМ и доноров крови, хотя специфические варианты гена для РЖ обнаружены не были. При сравнении сиквенсов образцов LMP1 из опухолевой ткани и клеток смывов ротоглотки у одних и тех же больных РЖВЭБ- общий вариант LMP1 был обнаружен в двух случаях, а в трех случаях опухолевые и ротоглоточные варианты гена различались. Полученные данные являются начальным этапом в изучении роли ВЭБ в канцерогенезе РЖВЭБ-, которая, вероятно, может быть установлена при проведении исследований на репрезентативном клиническом материале с использованием новых технологий.

Впервые был обнаружен вирус деформации крыла у медоносной пчелы Apis mellifera в Московской области методом полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР). При анализе методом молекулярной филогении нуклеотидная последовательность фрагмента VP2-VP1, выявленного нами, кластеризуется в общий кластер с ранее обнаруженными нуклеотидными последовательностями DWV из GenBank со всего мира, что подтверждает ранее полученные выводы об относительно недавнем распространении этого вируса у медоносной пчелы с помощью клеща Varroa destructor. Показано, что уровень гомологии для всех нуклеотидных последовательностей DWVсоставляет 98%, за исключением последовательности изолята 7D из Турции (гомология 96%), гомология с вирусом Какуго 96%, с вирусом 1 Varroa destructor - 84-86%, установлено преобладание незначимых нуклеотидных замен, в основном транзиций, что подтверждает эволюционную близость трех вирусов.

Рассмотрены пути горизонтальной передачи бакуловирусной инфекции у непарного шелкопряда (Lymantria dispar L.). Оригинальный способ моделирования естественных процессов в контролируемых условиях позволил количественно оценить влияние изучаемых факторов на возникновение эпизоотии. Исследовано 3 возможные модели передачи вируса от зараженных гусениц непарного шелкопряда к незараженным: 1) инфицированные и тестовые гусеницы содержались и питались совместно (комплексный путь); 2) инфицированные и тестовые гусеницы находились в непосредственной близости друг с другом, но были лишены возможности совместно питаться (воздушный путь); 3) тестовые гусеницы питались на листьях, на которых ранее находились инфицированные гусеницы (оральный путь). Исследования показали, что из рассмотренных моделей эффективными путями передачи инфекции для горизонтального распространения эпизоотий могут считаться комплексный и оральный. Кроме того, нахождение достаточного количества инфицированных гусениц в популяции приводит к снижению устойчивости здоровых насекомых к другим заболеваниям. Таким образом, целью инсектицидной обработки, учитывая способность личинок к пассивной миграции, является создание нескольких очагов инфекции, которые станут источником для распространения эпизоотии и будут содействовать общему снижению жизнеспособности популяции вредителя.