Вопросы вирусологии

Острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ) являются одной из наиболее серьезных проблем, влияющих на разведение обезьян, особенно среди импортированных и содержащихся в неволе приматов. Респираторные заболевания также являются значимой причиной заболеваемости и смертности в диких популяциях, большинство этих инфекций также могут поражать и людей. Многие виды обезьян, включая антропоидов, восприимчивы к ОРВИ. Вспышки спонтанных респираторных инфекций описаны во многих зоопарках и приматологических центрах мира. Вместе с тем изучение спонтанной и экспериментальной инфекции у лабораторных приматов представляет собой бесценный источник информации о биологии и патогенезе ОРВИ и по-прежнему является незаменимым инструментом для тестирования вакцин и лекарственных препаратов. Целью данного обзора литературы являлось обобщение и анализ опубликованных данных о циркуляции ОРВИ (вирусы парагриппа, аденовирусы, респираторно-синцитиальный вирус, вирусы гриппа, риновирусы, коронавирусы, метапневмовирусы, бокавирусы) среди диких и содержащихся в неволе приматов, а также результатов экспериментов по моделированию этих инфекций на обезьянах.

Введение. Предрасположенность к разному течению инфекционного процесса во многом связана с полиморфизмом генома человека, особенно генов, кодирующих белки иммунной системы. На ранних этапах гриппозной инфекции существенную роль в ограничении репликации вируса выполняют компоненты врожденного иммунитета – интерфероны I (α/β) и III (λ) типа.

Цель работы – изучить ассоциации однонуклеотидных полиморфизмов (ОНП) генов IFNL3 (rs8099917 T/G) и IFNL4 (rs12979860 C/T) с разным течением гриппозной инфекции и выявить генетические маркеры осложненного внебольничной пневмонией гриппа. Отмеченные выше гены влияют на продукцию интерферона-λ3.

Материалы и методы. Исследованы образцы от 456 пациентов с легким (n = 150), среднетяжелым (n = 173) и тяжелым (n = 133) течением гриппа. Вирусную РНК выявляли методами обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ПЦР). ОНП генов IFNL3 (rs8099917 T/G) и IFNL4 (rs12979860 C/T) устанавливали с помощью ПЦР. При анализе ассоциаций ОНП генов использовали программу SNPStats.

Результаты. У пациентов с генотипом С/Т или T/T по гену IFNL4 (rs12979860 C/T) чаще выявляли пневмонию, чем при генотипе С/С (ОШ 2,47 (1,31–4,63); р = 0,0044; q = 0,0059). Наличие одного аллеля Т увеличивало риск развития пневмонии (ОШ 2,02 (1,05–4,02); р = 0,006; q = 0,008). При генотипе Т/Т риск повышался более чем в 2 раза: ОШ 2,14 (1,31–3,48). Анализ ОНП гена IFNL3 (rs8099917 T/G) выявил более слабо выраженную ассоциацию G-аллеля с пневмонией (ОШ 1,86 (1,04–3,31); р = 0,03; q = 0,045).

Заключение. Генетическими маркерами повышенного риска внебольничной пневмонии при гриппе является наличие T-аллеля в гене IFNL4 (rs12979860 C/T) и в меньшей значимости G-аллеля в гене IFNL3 (rs8099917 T/G). Носители этих аллелей имеют повышенный риск развития пневмонии при гриппе, особенно в пожилом возрасте.

Введение. Мониторинг и исследование микроорганизмов, переносимых членистоногими, имеют важное значение. В последнее время с развитием методов секвенирования нового поколения (NGS) у насекомых идентифицировано множество ранее неизвестных вирусов.

Цель исследования. Изоляция вирусов из комаров отобранных в Республике Саха (Якутия), с последующим исследованием нового для России негевируса, выделенного из комаров вида Ochlerotatus caspius, включая определение его полной нуклеотидной последовательности, филогенетическую и вирусологические характеристики.

Материалы и методы. Изоляцию вируса Dezidougou проводили на культуре клеток C6/36 (Aedes albopictus). Электронную микроскопию осуществляли с использованием электронного микроскопа JEM 1400. Скрининговое определение нуклеотидных последовательностей выполняли с применением метода NGS на высокопроизводительном секвенаторе MiSeq, Illumina (США). Определение полногеномной нуклеотидной последовательности проводили секвенированием по методу Сэнгера. Филогенетический анализ выполняли с использованием базы данных GenBank и программ Vector NTI Advance 11, MEGA 11.

Результаты. Выделенный из комаров вирус эффективно реплицировался в клетках C6/36, вызывая их гибель. При этом он не размножался в использованных клеточных культурах млекопитающих. Выделенный вирус при интрацеребральном инфицировании мышей-сосунков не вызывал у них патологических проявлений. При электронно-микроскопическом исследовании очищенной вируссодержащей суспензии было показано наличие сферических вирусных частиц диаметром 45‒55 нм. Результаты полногеномного секвенирования идентифицировали его принадлежность к вирусу Dezidougou, впервые выделенному в Кот д’Ивуаре. Нуклеотидная последовательность генома штамма Yakutsk 2023 вируса Dezidougou была депонирована в базе данных GenBank (PP975071.1).

Заключение. Впервые в Российской Федерации был выделен и охарактеризован вирус Dezidougou рода Negevirus. Проведение дальнейших исследований распространенности негевирусов, их вирусологических особенностей, потенциального значения для здравоохранения и влияния на векторную компетентность переносчиков является важным и перспективным.

Введение. Грипп – острое респираторное вирусное инфекционное заболевание, индуцируемое одноименными вирусами. Существующие на сегодняшний день профилактические и терапевтические подходы имеют важное противоэпидемическое значение, однако имеется ряд проблем, таких как быстрое возникновение резистентных штаммов, отсутствие формирования перекрестного иммунитета и эффективность вакцин. Одним из подходов в создании противогриппозных средств является использование механизма РНК-интерференции и малых интерферирующих РНК (миРНК), комплементарных к матричной РНК мишени вирусных и клеточных генов.

Цель – оценка профилактического противогриппозного эффекта миРНК, направленных к клеточным генам NXF1, PRPS1 и NAA10, на модели in vitro.

Материалы и методы. Исследовали антигенные варианты вируса гриппа типа А: A/California/7/09 (H1N1), А/WSN/33 (H1N1) и A/Brisbane/59/07 (H1N1); клеточные культуры A549 и MDCK. Исследование выполняли посредством молекулярно-генетических (трансфекции, выделение нуклеиновых кислот, полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в реальном времени) и вирусологических методов (заражение клеточных культур, титрование по визуальному цитопатическому действию, оценка вирусного титра посредством метода Рамакришнана).

Результаты. Показано, что миРНК, таргетированные к клеточным генам NXF1, PRPS1 и NAA10 при профилактическом применении в клеточной культуре в концентрации 0,25 мкг на лунку, при инфицировании штаммами вируса гриппа A/California/7/09 (H1N1), А/WSN/33 (H1N1) и A/Brisbane/59/07 (H1N1) при множественности инфекции 0,01, снижают вирусную репликацию до уровня 220 ТЦД₅₀ на 1 мл клеточной среды, тогда как в контрольных необработанных клетках вирусный урожай составил ~10⁶ ТЦД₅₀ на 1 мл среды.

Выводы. Снижение экспрессии указанных генов NXF1, PRPS1 и NAA10 приводит к нарушению жизненного цикла и активности вирусов гриппа. Подобный подход может быть потенциально исследован и использован для близко- и дальнородственных представителей иных семейств вирусов.

Актуальность. Мониторинг возбудителей геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС) на территории Республики Беларусь является необходимым и актуальным, поскольку количество случаев ГЛПС у населения за последние годы увеличилось, а генетические характеристики возбудителей отсутствуют.

Цель исследования. Выявление ортохантавирусов, циркулирующих на территории Республики Беларусь, и определение их генетических характеристик.

Материалы и методы. Проведен скрининг зооматериала в объеме 613 образцов от мелких млекопитающих, отловленных на территории Республики Беларусь. Использовали метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени с тест-системой «Белар-ГЛПС-ПЦР/РВ». Положительные образцы секвенировали методом Сэнгера. Сравнительный и филогенетический анализ проводили с использованием программ MegAlign из пакета Lasergene (DNASTAR, США) и Mega 11.

Результаты. При первичном скрининге было обнаружено 32 ПЦР-положительных образца (5,2%), из которых 24 образца относились к вирусу Пуумала (PUUV) и 8 образцов ‒ к вирусу Добрава-Белград (DOBV). Были секвенированы 3 нуклеотидные последовательности участка М-сегмента PUUV, 2 последовательности участка М-сегмента длиной 291 пара нуклеотидов (п.н.) и одна последовательность участка S-сегмента длиной 348 п.н. DOBV. Сравнительный анализ и филогения показали, что выявленные геноизоляты PUUV принадлежат к русской генетической линии, к той же сублинии, что и штаммы, распространенные в Московской и Курской областях. Выявленные геноизоляты DOBV продемонстрировали наиболее близкое родство к штаммам из центрального региона европейской части России.

Заключение. Результаты молекулярно-биологического анализа показали, что PUUV циркулирует на территории Республики Беларусь и распространен повсеместно. В то же время DOBV выявлен на территории четырех областей республики, что свидетельствует о расширении ареала данного возбудителя ГЛПС. В Республике Беларусь впервые получены нуклеотидные последовательности ортохантавирусов и проведен их молекулярно-генетический анализ.