Том 68, № 2 (2023)
- Год: 2023
- Дата публикации: 18.05.2023
- Статей: 10
- URL: https://virusjour.crie.ru/jour/issue/view/61
Весь выпуск
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Влияние комплексов миРНК на репродукцию вируса гриппа A (Orthomyxoviridae: Alphainfluenzavirus) in vivo
Аннотация
Введение. Грипп является одной из самых актуальных проблем мирового здравоохранения. Несмотря на широкий спектр противогриппозных препаратов, остро стоит проблема формирования вирусной резистентности, что требует поиска новых возможностей её преодоления. Перспективным решением представляется создание лекарственных препаратов, действие которых основано на ингибировании активности клеточных генов посредством РНК-интерференции.
Цель – оценка профилактического потенциала миРНК, направленных к клеточным генам FLT4, Nup98 и Nup205 in vivo, в отношении гриппозной инфекции.
Материалы и методы. В исследовании использован штамм вируса гриппа A/California/7/09 (H1N1), мыши BALB/c. Введение миРНК и заражение животных выполняли интраназально. Учёт результатов выполняли посредством молекулярно-генетических и вирусологических методов.
Результаты. Применение комплексов миРНК Nup98.1 и Nup205.1 приводило к достоверному снижению вирусной репродукции и вРНК на третьи сутки после заражения. Параллельно с этим выполнялась одновременная трансфекция двух комплексов миРНК (Nup98.1 и Nup205.1). При использовании данного комплекса также отмечалось достоверное снижение вирусного титра и вРНК по сравнению с контрольными группами.
Выводы. Применение миРНК in vivo способно приводить к противовирусному эффекту как при одиночном, так и при одновременном подавлении активности нескольких клеточных генов. Результаты свидетельствуют о том, что использование миРНК, направленных к клеточным генам, чьи продукты экспрессии участвуют в процессе вирусной репродукции, является одним из потенциально перспективных методов профилактики и терапии не только гриппозной, но и других респираторных инфекций.
Частота выявления IgM-антител к вирусу Зика у беременных женщин в Северной Нигерии
Аннотация
Введение. Заражение вирусом Зика (ZIKV) во время беременности может приводить к тяжелым последствиям как для матери, так и для развивающегося плода.
Целью данного исследования являлось определение распространенности ZIKV-инфекции среди беременных женщин, обратившихся за медицинской помощью в Учебную больницу Университета Ахмаду Белло.
Материалы и методы. Собранные образцы сыворотки крови были протестированы методами иммуноферментного анализа и ОТ-ПЦР, для сбора соответствующей информации об участниках исследования использовалась структурированная анкета.
Результаты. Из 180 обследованных беременных женщин 53 были положительными по анти-ZIKV IgM, частота выявления составила 29,4%. Только 6 из 53 серопозитивных образцов были положительными по РНК ZIKV при последующем тестировании в ОТ-ПЦР. Лихорадка и головная боль были наиболее частыми симптомами, связанными с инфекцией.
Заключение. Полученные данные указывают на возможную вспышку лихорадки Зика в Северной Нигерии, что подчеркивает важность принятия беременными женщинами мер предосторожности во избежание заражения.
Выбор эффективного режима инактивации вируса Pseudopestis avium (Paramyxoviridae: Orthoavulovirus: Avian orthoavulovirus 1) для изготовления вакцины против болезни Ньюкасла
Аннотация
Введение. Болезнь Ньюкасла (БН) относится к категории особо опасных. Её основным источником является инфицированная и переболевшая птица. Всего через сутки после инфицирования начинается выделение возбудителя, а после выздоровления вирус сохраняется в организме ещё на протяжении 2–4 месяцев. Сложность окончательного устранения возбудителя болезни заключается в его способности к длительному сохранению во внешней среде и возможности постоянной циркуляции в одном комплексе между различными половозрастными группами птиц. Основным элементом защиты птиц от БН является иммунопрофилактика, основанная на применении вакцин, которые содержат инактивированный штамм вируса БН (ВБН).
Цель – оптимизация параметров инактивации актуального штамма Н ВБН формальдегидом в конечных концентрациях 0,01, 0,025, 0,05 и 0,1% при температурных условиях 20 ± 2 и 37 ± 0,5 °С.
Материалы и методы. В работе использовали вируссодержащую суспензию штамма Н ВБН с исходной биологической активностью 10,75 lg ЭИД50/см3, выращенного культивированием в 10-суточных развивающихся куриных эмбрионах.
Результаты. После введения испытуемых инактивированных суспензий ВБН при разных температурных режимах и концентрациях инактиванта у привитых птиц на 16-е сутки в сыворотках крови обнаружение антител к ВБН в среднегеометрических титрах составило не ниже 1 : 63 в реакции торможения гемагглютинации, что дает возможность считать исследуемые инактивированные суспензии антигенно активными.
Заключение. Установлены оптимальные параметры режима инактивации (конечная концентрация, температура и время инактивации) штамма Н ВБН. Процесс инактивации в условиях температуры 37 ± 0,5 °С с концентрациями инактиванта 0,01, 0,025, 0,05, 0,1% длится до 72, 22, 18, 12 ч соответственно. Процесс инактивации в условиях при температуре 20 ± 2 °С с концентрациями инактиванта 0,05, 0,1% длится до 22 и 18 ч соответственно.
Оценка динамики выявления жизнеспособного SARS-CoV-2 (Coronaviridae: Betacoronavirus: Sarbecovirus) в биологических образцах, полученных от пациентов с COVID-19 в условиях стационара, как одного из показателей инфекционности вируса
Аннотация
Введение. Изучение механизмов передачи вируса SARS-CoV-2 является основой для выстраивания стратегии противоэпидемических мероприятий в условиях пандемии COVID-19. Понимание того, в какой временнóй перспективе больной может распространять SARS-CoV-2, так же важно, как и знание самих механизмов передачи вируса. Эта информация необходима для разработки эффективных мер профилактики инфицирования путём разрыва цепочек передачи вируса.
Цель работы – выявление инфекционного вируса SARS-CoV-2 в образцах пациентов в динамике заболевания и определение продолжительности выделения вируса пациентами с различной тяжестью течения COVID-19.
Материалы и методы. У пациентов, включённых в исследование, проводили сбор биоматериала (назофарингеальный мазок) для дальнейшего анализа методом количественной ОТ-ПЦР и вирусологического определения инфекционности для мазка.
Результаты. Нами определены сроки сохранения инфекционности вируса у пациентов, госпитализированных с тяжёлым и среднетяжёлым течением COVID-19. По результатам исследования проведён анализ зависимости между количеством детектируемой РНК SARS-CoV-2 с помощью ОТ-ПЦР и инфекционностью вируса в культуре клеток in vitro у больных COVID-19. Медианное время выделения пациентами инфекционного вируса составило 8 дней. Кроме того, проведён сравнительный анализ разных протоколов выявления РНК вируса относительно обнаружения инфекционного вируса.
Заключение. Полученные данные позволяют оценить динамику выявления и вирусную нагрузку SARS-CoV-2 у больных COVID-19, а также значение установленных параметров для последующего распространения вируса и организации профилактических мероприятий.
Циркуляция вирусов герпеса крупного рогатого скота (Herpesviridae: Varicellovirus) и диареи крупного рогатого скота (Flaviviridae: Pestivirus среди диких парнокопытных животных Московской области
Аннотация
Введение. Пестивирусы и вирусы семейства Herpesviridae широко распространены среди разных видов копытных, однако основная информация об этих возбудителях связана с их влиянием на сельскохозяйственных животных. Данные о случаях выявления вирусов диареи (BVDV) и герпеса крупного рогатого скота (КРС) у диких копытных, полученные в разных странах в последние годы, ставят вопрос о роли диких животных в эпизоотологии болезней КРС.
Цель работы – изучение распространённости герпесвирусов и пестивирусов в популяции диких парнокопытных Московской области.
Материалы и методы. Образцы паренхиматозных органов и смывы со слизистых от 124 диких парнокопытных (лосей и косуль), добытых в рамках спортивной и любительской охоты сезонов 2019–2022 гг. на территории Московской области, исследовали молекулярно-генетическими (ПЦР) и серологическими методами на наличие генетического материала и антител к возбудителям инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи КРС.
Результаты. Генетический материал BVDV выявили в образце от одного лося, ДНК герпесвирусов КРС – в образцах от 3 косуль и 2 лосей, отстрелянных на территории Московской области. Антитела к вирусам находили у животных разного пола и возраста, общая серопревалентность диких парнокопытных к герпесвирусам и пестивирусам составила 46 и 29% соответственно.
Заключение. Дикие жвачные парнокопытные Московской области могут быть естественным резервуаром герпесвирусов КРС, и это необходимо учитывать при планировании и организации мероприятий по контролю и оздоровлению территории от инфекционного ринотрахеита КРС. Случаи инфицирования диких парнокопытных животных BVDV носят менее распространённый характер, поэтому для окончательного установления их роли в эпизоотологии этой болезни у КРС необходимы дополнительные исследования.
Антигенная и иммуногенная активность вирусоподобных частиц на основе рекомбинантных главных капсидных белков вирусов геморрагической болезни кроликов (Caliciviridae: Lagovirus) геногрупп GI1, GI2
Аннотация
Введение. Вирусная геморрагическая болезнь кроликов (ГКБ) – остро протекающее высококонтагиозное заболевание, возбудителями которого являются патогенные лаговирусы геногрупп GI1 и GI2. Антитела к главному капсидному белку (Vp60) вируса ГБК являются протективными.
Цель работы – оценка антигенной и иммуногенной активности вирусоподобных частиц (ВпЧ) на основе рекомбинантных главных капсидных белков вируса ГБК геногрупп GI1 и GI2 (recVP60-GI1 и recVP60-GI2).
Материалы и методы. Полученные в бакуловирусной системе экспрессии recVP60-GI1 и recVP60-GI2 исследовали методом электронной микроскопии и вводили клинически здоровым кроликам в возрасте 1,5–3 месяца в дозе 50 мкг. На 21-й день после иммунизации кроликов заражали вирулентными штаммами вируса ГБК «Воронежский-87» и «Тула» в дозе 103 ЛД50, а сыворотки крови исследовали в ИФА на наличие антител к вирусу ГБК.
Результаты. В культуре клеток Нi-5 получены recVP60-GI1 и recVP60-GI2, обладающие гемагглютинирующей активностью и формирующие ВпЧ размером 30–40 нм. На 21-е сутки после введения ВпЧ у кроликов выявляли специфические антитела к вирусу ГБК с титром 1 : 200–1 : 800. Иммуногенная активность ВпЧ recVP60-GI1 составила 90 и 40%, а ВпЧ recVP60-GI2 – 30 и 100% после контрольного заражения вирусом ГБК 1-го и 2-го генотипа соответственно при 100% иммуногенности их смеси.
Обсуждение. ВпЧ из recVP60-GI1 и recVP60-GI2 обладают гемагглютинирующей, антигенной и иммуногенной активностью, что свидетельствует о возможности их использования в качестве компонентов препаратов для специфической профилактики ВГБК у кроликов. Результаты контрольного заражения показали необходимость наличия в составе вакцины антигена обоих генотипов вируса ГБК.
Заключение. RecVP60-GI1 и recVP60-GI2 образуют ВпЧ, обладающие гемагглютинирующей и антигенной активностью, и защищают животных при контрольном заражении вирулентными штаммами вируса ГБК генотипов GI1 и GI2 на уровне 90–100%.
Противовирусная активность водного экстракта базидиального гриба Inonotus obliquus в отношении вируса SARS-CоV-2 (Coronaviridae: Betacoronavirus: Sarbecovirus) в экспериментах in vivo на мышах линии BALB/с
Аннотация
Введение. Продолжающаяся пандемия COVID-19 в сочетании с сезонными вспышками респираторных вирусных инфекций требует направленной противовирусной профилактики общеукрепляющими, иммуностимулирующими препаратами. В ряду малотоксичных, но в то же время активных в отношении нескольких вирусов одновременно препаратов выделяют соединения природного происхождения. Одним из самых известных является водный экстракт базидиального гриба Inonotus obliquus, плодовое тело которого носит название чага.
Цель работы – изучение in vivo противовирусной активности экстракта базидиального гриба I. obliquus в отношении вируса SARS-CoV-2.
Материалы и методы. В качестве исследуемого соединения применяли образец (20-17) экстракта базидиального гриба I. obliquus. В работе использовали штамм геноварианта омикрон ВА.5.2 вируса SARS-CoV-2. Эксперименты проводили на мышах BALB/c, полученных из питомника ФБУН ГНЦ БВ «Вектор» Роспотребнадзора. Вирусная нагрузка SARS-CoV-2 была определена с помощью количественной ПЦР-РВ с обратной транскрипцией. Тяжесть поражения тканей лёгких оценивали гистологическими методами.
Результаты. Определена оптимальная концентрация водного экстракта базидиального гриба I. obliquus для внутрижелудочного введения мелким лабораторным животным. Изучена противовирусная активность водного экстракта базидиального гриба I. obliquus в отношении генетического варианта омикрон ВА.5.2 вируса SARS-CoV-2 на модели инбредных мышей линии BALB/c. Определены максимальные значения вирусной нагрузки в тканях лёгких экспериментальных животных через 72 ч после интраназального инфицирования в дозе 2,85 lg ЦПД50. Методом количественной ПЦР-РВ определено достоверное снижение вирусной нагрузки относительно контроля на 4,65 и 5,72 lg копий/мл в тканях лёгких и носовой полости соответственно. Гистологическими методами выявлена зависимость уменьшения количества и частоты наблюдаемых патоморфологических изменений тканей лёгких мышей с введением исследуемого соединения.
Заключение. Полученные результаты свидетельствуют о возможности применения водного экстракта базидиального гриба I. obliquus в качестве профилактического средства против циркулирующих геновариантов вируса SARS-CoV-2.
Использование вирусоподобных частиц на основе рекомбинантных вирусных белков VP2/VP6 ротавируса А для оценки гуморального иммунного ответа методом ИФА
Аннотация
Введение. Ротавирусная инфекция является одной из основных проблем инфекционной патологии человека, животных и птиц. Оценку иммуногенности и эффективности всех типов вакцин против ротавируса типа А (РВА) проводят на лабораторной модели животных, в качестве которой обычно используют грызунов или новорождённых поросят, при этом для их проведения необходимо наличие ИФА, позволяющего выявить вирусспецифические антитела определённого класса.
Цель – разработка непрямого ИФА с использованием вирусоподобных частиц (VLP), состоящих из белков VP2/VP6 РВА, в качестве антигена для выявления и оценки уровня ВГА-специфических антител классов IgG, IgM, IgA в иммунном ответе к ротавирусу А.
Материалы и методы. Получение и очистка VP2/VP6 VLP РВА, электронная микроскопия, электрофорез в ПААГ-ДСН, иммуноблоттинг, иммуноферментный анализ, реакция нейтрализации.
Результаты. В статье представлены результаты получения рекомбинантного бакуловируса, содержащего ген VP2/VР6 GFP РВА, определения его инфекционной активности и использования для наработки VLP. Показана морфология, определён структурный состав и установлена высокая антигенная активность VP2/VP6 VLP РВА. На его основе разработан ИФА и приведены результаты выявления специфических антител к РВА в сыворотке крови различных видов животных.
Заключение. Разработанный ИФА с использованием VP2/VP6 VLP РВА в качестве универсального антигена позволяет выявлять весь спектр IgG-, IgM-, IgA-антител в иммунном ответе к РВА, что имеет важное научно-практическое значение в оценке иммуногенности и эффективности традиционных и разрабатываемых вакцин против ротавирусной инфекции.