Том 59, № 3 (2014)

В работе впервые определены последовательности генома трех вирусов, два из которых - Сахалин (SAKV - Sakhalin virus; iD GenBank KF801659) и Парамушир (PRMV - Paramushir virus; KF801656) - входят в группу Сахалин в составе рода Nairovirus (Bunyaviridae). Уровень гомологии каталитического центра РНК-зависимой РНК-полимеразы (RdRp) нуклеотидных последовательностей PRMV и SAKV составляет около 81%, аминокислотных - 98,5%. С другими наировирусами, для которых известна полная последовательность генома, SAKV обладает гомологией в среднем от 25% (белок нуклеокапсида N) до 50% (RdRp). При этом максимальный уровень гомологии (50,3% по RdRp) SAKV имеет с вирусами Крымской-Конго геморрагической лихорадки (CCHFV - Crimean-Congo hemorrhagic fever virus), Дугбе (DUGV - Dugbe virus) и болезни овец Найроби (NSDV - Nairobi sheep disease), которые так же, как и SAKV, экологически связаны с иксодовыми клещами (Ixodidae). Третий вирус, изученный в данной работе, - Рукутама (RUKV - Rukutama virus; KF892052-KF892054) - на основании антигенных и морфологических характеристик был ранее предварительно отнесен к роду Nairovirus, предположительно - к группе Сахалин. Согласно результатам проведенного анализа полной последовательности генома RUKV является представителем рода Phlebovirus (Bunyaviridae). RUKV обладает высоким уровнем гомологии (93-95,5%) с ранее описанным новым флебовирусом Командоры (KOMV - Komandory virus). RUKV и KOMV формируют отдельную филогенетическую ветвь в составе группы Укуниеми (UUKV - Uukuniemi virus). Из флебовирусов данной группы RUKV и KOMV наиболее близки к вирусу Манава (MWAV - Manawa virus), изолированному из клещей Argas abdussalami Hoogstraal et McCarthy, 1965 в Пакистане, и обладают с ним 65-74% гомологией.

Вирус Арташат (ARTSV - Artashat virus) выделен от клещей Ornithodoros alactagalis issaakjan, 1936 (Argasidae Koch, 1844), собранных в норе малого тушканчика (Allactaga elater Lichtenstein, 1825) в Армении в 1972 г. Позднее ARTSV был изолирован от O. verrucosus Olenev, Sassuchin et Fenuk, 1934 из нор персидской песчанки (Meriones persicus Blanford, 1875) в Азербайджане. На основании морфологии вириона ARTSV отнесен к группе неклассифицированных буньявирусов сем. Bunyaviridae. В настоящей работе геном ARTSV (GenBank iD: KF801650) частично секвенирован. Уровень гомологии ARTSV с известными наи-ровирусами составляет от 42% (с вирусом Иссык-Куль) до 58% (с вирусом Раза, группа Хьюз) по нуклеотидной последовательности каталитического центра РНК-зависимой РНК-полимеразы (RdRp). Гомология с наировирусами по аминокислотной последовательности ARTSV в среднем 65-70%. Низкий уровень гомологии ARTSV и его равноудаленное положение от остальных наировирусов позволяют классифицировать ARTSV как новый прототипный вид в составе рода Nairovirus, который образует самостоятельную антигенную и филогенетическую группу.

Цель работы состояла в анализе антигенной структуры гемагглютинина (HA) штаммов пандемического вируса гриппа A(H1N1)pdm09 с помощью моноклональных антител (МКА) и разработке иммуноферментного метода выявления пандемических штаммов. Результаты конкурентного анализа показали, что 6 МКА к HA пандемического вируса гриппа А/IIV-Moscow/01/2009 (H1N1)swl выявляли 6 эпитопов. Исследовано взаимодействие МКА с 22 штаммами, циркулировавшими на территории РФ в 2009-2012 гг., в реакции торможения гемагглютинации (РТГА). МКА значительно различались по степени подавления гемагглютинирующей активности штаммов. МКА 5F7 выявляло все исследованные штаммы, МКА 3А3 и 10G2 реагировали с большинством из них. На основе 3 данных МКА разработан высокочувствительный сэндвич-вариант иммуноферментного анализа для выявления штаммов пандемического вируса гриппа и дифференцировки их от сезонных вирусов гриппа. Консервативность эпитопа МКА 5F7 на молекуле HA позволяет использовать его для индикации штаммов пандемического вируса гриппа в РТГА. 3 МКА - 3D9, 6A3 и 1Е7, направлены к вариабельным эпитопам HA, чувствительны к нескольким аминокислотным заменам в антигенных сайтах Sa, Sb и Ca 2, а также в рецепторевязывающем домене. Данные МКА могут использоваться для выявления различий в структуре HA и изучения антигенного дрейфа штаммов пандемического вируса гриппа А(H1N1)pdm09.