An ultrastructural study of the cervix epitelium infected with the human papillomavirus types 16 and 18 before and after treatment with contrasting thermo-laser therapy

Full Text

Введение. Рак шейки матки остается одной из самых актуальных проблем гинекологии. Заболеваемость раком этой локализации неуклонно растет и составляет приблизительно 30% от всех гинекологических заболеваний. В настоящее время доказана связь возникновения рака шейки матки с наличием у больных папил-ломавирусной инфекции высокого онкогенного риска. Существующие методы лечения патологии шейки матки имеют свои преимущества и недостатки. Ранее нами был предложен принципиально новый метод деструктивного воздействия на очаги поражения с одновременной стимуляцией противовирусного иммунного отклика на это воздействие, что позволяет целенаправленно, а значит более успешно лечить больных с папилломави-русной инфекцией высокого онкогенного риска и проводить целенаправленную профилактику рака шейки матки [1]. Для лечения инфицированной вирусом папилломы человека (ВПЧ) поверхности шейки матки нами была проведена модификация вышеупомянутого метода, который получил название контрастной термолазерной терапии (КТЛТ) [2]. Новизна метода заключается в воздействии на инфицированную вирусом слизистую оболочку шейки матки кратковременного взрывного теплового воздействия. Существенным и принципиальным отличием метода от известных и используемых в гинекологии является применение лазерного излучения с параметрами (длина волны и мощность), исключающими повреждения биотканей при их непосредственном облучении. При этом лечебный эффект достигается за счет облучения биоткани, на которую предварительно нанесен тонкий слой красителя, поглощающего энергию лазерного излучения. При облучении красителя лазерным излучением в результате термохимической реакции в зоне облучения происходит выделение тепловой и механической энергии. При этом краситель выгорает и тепловое воздействие прекращается, так как непосредственно биоткань не поглощает лазерное излучение. При таком воздействии глубина деструкции биоткани не превышает 0,3 мм. При проведении лечения эпителия, пораженного ВПЧ, возникает вопрос: как быстро и насколько качественно восстанавливаются клетки эпителия. Поэтому целью настоящего исследования явилось проведение ультраструктурных исследований эпителия шейки матки пациенток, инфицированных ВПЧ типов Контактная информация: Маныкин Анатолий Анатольевич, проф.; e-mail: anmanykin@mail.ru 47 Рис. 1. Ультратонкий срез биоптата больной до лечения. 1 - ядра эпителиальных клеток; 2 - десмосомы. Рис. 1-5 получены методом ТЭМ, контрастирование уранилацетатом. Рис. 4. Ультратонкий срез струпа после лечения. 1 - фрагменты клеток; 2 - бактерии. Рис. 2. Ультратонкий срез осадка мазка, взятого с поверхности эпителия шейки матки. 1 - слущивающиеся клетки эпителия, в промежутках видны клетки крови. Рис. 5. Ультратонкий срез осадка мазка из цервикального канала больной до проведения лечения. Рис. 3. Ультратонкий срез биоптата больной после лечения и восстановления эпителия. 1 - ядра эпителиальных клеток; 2 - десмосомы. 16 и 18, до и после лечения, а также струпа эпителия, удаляемого сразу после облучения. Материалы и методы. Ранее были пролечены 144 пациентки с ВПЧ-патологией шейки матки и было показано, что эффективность элиминации ВПЧ типа 16 составляет 94%, а ВПЧ типа 18 - 88%. При этом рецидивов ВПЧ-инфекций не было в течение 12 мес наблюдения. Для анализа результатов ультраструктурных исследований эпителия шейки матки из числа успешно пролеченных отобрали четырех пациенток, у которых были взяты биоптаты и мазки из цервикального канала для анализа методом ПЦР, цитологических и гистологических исследований, а также электронной микроскопии. Результаты и обсуждение. Ультраструктура материала биоптатов больных до лечения представлена на рис. 1. На микрофотографии, полученной методом трансмиссионной электронной микроскопии (ТЭМ), четко выявляются ядра эпителиальных клеток, хорошо виден контакт клеток друг с другом через десмосомы, которые расположены по клеточной мембране. Этот срез биоптата показывает, что эти клетки расположены не в верхнем слое, а ближе к среднему слою эпителия, так как поверхностные клетки эпителия, полученные путем взятия мазка, представляют собой, как видно на рис. 2, уже сильно измененную ультраструктуру. Для них характерны разрушенные ядра, потери клеточных огранелл и общее нарушение структуры морфологии клетки, так как это отмирающие, слущивающиеся клетки эпителия. Интересно, что после проведения лечения, в отдаленном периоде (6 мес) ультраструктура клеток эпителия из биоптата практически совпадает с нормой (рис. 3) - также наблюдаются типичные десмосомы. ПЦР, проведенная на этом материале, т.е. из биоптатов и мазков пролеченных пациенток, показала отсутствие ДНК па-пилломавируса. Особый интерес представлял анализ облученного эпителия, т.е. та часть эпителия, которая после воздействия излучения удалялась с поверхности (струп). Этот материал был также проанализирован на сохранение ультраструктуры клеток. При этом выяснилось, что типичная ультраструктура нормальных клеток полностью изменена; невозможно выявить ни ядерный материал, ни цитоплазматический, ни мембраны, ни ор-ганеллы, ни контактные структуры (десмосомы; рис. 4). Клетки струпа сильно разрушены, визуально определяются отдельные клеточные фрагменты. Интересно сопоставить этот материал по измененной ультраструктуре сопутствующих бактерий, которые присутствуют в материале мазка: действительно, в мазке, взятом у больной до проведения лечения, четко выявляется как внутренняя структура, так и оболочка бактерии, а также структура сопутствующей флоры эпителия шейки матки (рис. 5). Важно отметить, что ДНК бактерии на рис. 4, в струпе, имеет очень плотный характер, что типично для денатурированной ДНК, в то время как на рис. 5 в аналогичных структурах ДНК представляет собой хорошо разрешимые структуры. В облученном материале методом ПЦР ДНК папилломавирусов не обнаружена. Заключение. Полученные данные об ультраструктуре материала эпителия шейки матки до и после лечения пациенток методом КТЛТ подтверждают отсутствие ДНК папилломавирусов у пролеченных женщин и сохранение нормальной ультраструктуры клеток восстановленного после проведенного лечения эпителия. Вкупе с ранее проведенными исследованиями [2, 3] метод лечения КТЛТ шейки матки показывает высокую эффективность в элиминации ВПЧ типов 16 и 18 и, кроме того, позволяет констатировать быстрое и эффективное восстановление эпителия после проведенного лечения. Метод был отмечен золотой медалью в салоне “Инновационные технологии в медицине ” (Женева) в 2011 г. [4].

References

Supplementary files