Быстрый иммунохимический метод выявления ортопоксвирусов (Orthopoxvirus, Chordopoxvirinae, Poxviridae)

Обложка


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Введение. Значительное снижение популяционного иммунитета к поксвирусам вследствие отмены всеобщей вакцинации против оспы сделало основную часть населения восприимчивой к заражению патогенными ортопоксвирусами. Тяжёлые последствия такого заражения обусловливают необходимость разработки чувствительных и оперативных методов индикации патогенов.
Цель исследования – разработка чувствительного, быстрого и простого в применении иммунохимического метода для выявления ортопоксвирусов во внелабораторных условиях.
Материал и методы. В работе использовали культуральный вирус осповакцины (ВОВ) с разной степенью очистки и кроличьи поликлональные антиоспенные антитела класса IgG. Анализ выполняли на основе ранее разработанного набора для дот-иммуноанализа на плоских белковых матрицах.
Результаты и обсуждение. Установлено, что одностадийный дот-иммуноанализ может быть выполнен с использованием поликлональных антител как в качестве иммобилизованного на подложке реагента захвата, так и связанного с частицами коллоидного золота реагента детекции. Показана обратная зависимость эффективности выявления ВОВ от степени очистки препаратов от субвирусных структур. В неочищенном препарате чувствительность ускоренного определения вируса оказалась примерно в 30 раз выше, чем в чистом вирусном материале. Увеличение чувствительности, вероятно, происходит за счёт формирования на субвирусных структурах крупных агрегатов сенсибилизированных частиц золота и одновременного связывания их с антителами захвата на подложке. Тест специфичен и не выявляет перекрёстных реакций с гетерогенными вирусами, вызывающими экзантематозные заболевания.
Заключение. Ускоренный вариант дот-иммуноанализа позволяет сократить определение до 40 мин и обеспечить чувствительность выявления ВОВ в неочищенных вирусных препаратах до диапазона 105–104 БОЕ/мл. Полная укомплектованность, простота выполнения анализа и возможность визуального учёта результатов позволяют применять тест во внелабораторных условиях.

Об авторах

А. Г. Полтавченко

ФБУН «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора

Автор, ответственный за переписку.
Email: poltav@vector.nsc.ru
ORCID iD: 0000-0003-2408-5611

доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник отдела разработки и производства средств диагностики вирусных заболеваний

630559, р.п. Кольцово, Новосибирская область

Россия

А. В. Ерш

ФБУН «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-9220-1250
630559, р.п. Кольцово, Новосибирская область Россия

О. С. Таранов

ФБУН «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-6746-8092
630559, р.п. Кольцово, Новосибирская область Россия

С. Н. Якубицкий

ФБУН «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора

Email: fake@neicon.ru
630559, р.п. Кольцово, Новосибирская область Россия

П. В. Филатов

ФБУН «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора

Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0001-7763-3808
630559, р.п. Кольцово, Новосибирская область Россия

Список литературы

  1. Rimoin A.W., Graham B.S. Whither monkeypox vaccination. Vaccine. 2011; 29(Suppl. 4): D60-4. DOI: https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2011.09.004
  2. Бондарев В.П., Терентьев А.И., Мельников С.А., Бондарева Т.А. Внедрение таблетированной оспенной вакцины «ТЭОВАК» в серийное производство для обеспечения биологической безопасности населения Российской Федерации. Проблемы особо опасных инфекций. 2010; (2): 66-8.
  3. Fitzgibbon J.E., Sagripanti J. Simultaneous identification of orthopoxviruses and alphaviruses by oligonucleotide macroarray with special emphasis on detection of variola and Venezuelan equine encephalitis viruses. J. Virol. Methods. 2006; 131(2): 160-7. DOI: https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2005.08.007
  4. Максютов Р.А. Комплексный подход к видоспецифичной детекции вируса оспы коров. Проблемы особо опасных инфекций. 2016; (4): 60-3. DOI: https://doi.org/10.21055/0370-1069-2016-4-60-63
  5. Pulford D., Meyer H., Brightwell G., Damon I., Kline R., Ulaeto D. Amplification refractory mutation system PCR assays for the detection of variola and Orthopoxvirus. J. Virol. Methods. 2004; 117(1): 81-90. DOI: https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2004.01.001
  6. Probst A., Besse A., Favry E., Imbert G., Tanchou V., Castell F.A., et al. Human CD4 T cell epitopes selective for Vaccinia versus Variola virus. Mol. Immunol. 2013; 53(4): 453- 9. DOI: https://doi.org/10.1016/j.molimm.2012.10.011
  7. Chen L., Wang H., Guo T., Xiao C., Liu L., Zhang X., et al. A rapid point-of-care test for dengue virus-1 based on a lateral flow assay with a near-infrared fluorescent dye. J. Immunol. Methods. 2018; 456: 23-7. DOI: https://doi.org/10.1016/j.jim.2018.02.005
  8. Ерш А.В., Полтавченко А.Г., Пьянков С.А., Агафонов А.П., Кривенчук Н.А., Буторин Д.В. Метод комплексной оценки гуморального иммунитета к детским вакциноуправляемым вирусным инфекциям. Вопросы вирусологии. 2015; 60(1): 45-9.
  9. Poltavchenko A.G., Nechitaylo O.V., Filatov P.V., Ersh A.V., Gureyev V.N. Multiplex method for initial complex testing of antibodies to blood transmitted diseases agents. J. Virol. Methods. 2016; 236: 231-6. DOI: https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2016.08.003
  10. Скоупс Р. Методы очистки белков. Пер с англ. М.: Мир; 1985: 66-72.
  11. Poltavchenko A.G., Zaytzev B.N., Ersh A.V., Korneev D.V., Taranov O.S., Filatov P.V., et al. The selection and optimization of the detection system for self-contained multiplexed dot-immunoassay. J. Immunoassay Immunochem. 2016; 37(5): 540-54. DOI: https://doi.org/10.1080/15321819.2016.1174134
  12. Poltavchenko A.G., Zaitsev B.N., Ersh A.V., Taranov O.S., Korneev D.V., Nikonov A.M. Selection of Substrate Material for Protein Matrices. Prot. Met. Phys. Chem+. 2016; 52(2): 301-7. DOI: https://doi.org/10.1134/S2070205116020234

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Полтавченко А.Г., Ерш А.В., Таранов О.С., Якубицкий С.Н., Филатов П.В., 2019

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ПИ № ФС77-77676 от 29.01.2020.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах