Отправить статью по E-mail Возможность культивирования мутантного варианта Adel2 аденовируса на культуре клеток 293
- Выпуск: Том 48, № 6 (2003)
- Страницы: 30-33
- Раздел: Статьи
- URL: https://virusjour.crie.ru/jour/article/view/11816
- ID: 11816
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Результаты ПЦР-анализа и секвенирования ДНК мутантного варианта аденовируса серотипа 5 Adel2, обладающего способностью избирательно инфицировать и лизировать р53-дефектные опухолевые клетки человека и прошедшего 10 пассажей, свидетельствуют о высокой степени стабильности его генотипа и приобретенных фенотипических свойств при последовательном пассировании на клетках 293. При этом в процессе культивирования и пассирования достоверно показано отсутствие примеси аденовируса дикого типа.
При экспериментальном изучении вируспродуктивных свойств исследуемой перевиваемой культуры клеток 293 методом монослойного культивирования отмечено, что наибольший урожай Adel2 удается получать при 50% цитопатическом действии на клеточном монослое. Эффективные дозы вируса для заражения культур клеток находятся в диапазоне 100-10 ТЦПДМ на клетку. С целью экономии вирусного материала для наработки вируса выбрана доза заражения клеточного монослоя 10 ТЦПДМ на клетку. Полученные результаты демонстрируют возможность и перспективность использования культуры клеток 293 для производственной наработки мутантного штамма аденовируса Adel2.
При экспериментальном изучении вируспродуктивных свойств исследуемой перевиваемой культуры клеток 293 методом монослойного культивирования отмечено, что наибольший урожай Adel2 удается получать при 50% цитопатическом действии на клеточном монослое. Эффективные дозы вируса для заражения культур клеток находятся в диапазоне 100-10 ТЦПДМ на клетку. С целью экономии вирусного материала для наработки вируса выбрана доза заражения клеточного монослоя 10 ТЦПДМ на клетку. Полученные результаты демонстрируют возможность и перспективность использования культуры клеток 293 для производственной наработки мутантного штамма аденовируса Adel2.
Список литературы
- Ашмарин И. П., Воробьев А. А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. - Л., 1962.
- Вирусология. Методы / Под ред. Б. Мейхи. - М, 1988.
- Качко А. В., Терновой В. А., Киселев Н. Н. и др. Рекомбинантная плазмидная ДНК pAd5-f, несущая фрагмент генома аденовируса 5 типа с делецией в гене Е1В-55К, и штамм мутантного аденовируса Adel2, обладающий селективной противоопухолевой активностью. Заявка на пат. приоритетная справка № 2001106247 от 05.03.2001.
- American Type Culture Collection. Catalogue of Cell Lines and Hybridomas. - 6-th Ed. - Washington, 1988.
- Bischoff J. R., Kirn D. H., Williams A. et al. An adenovirus mutant that replicates selectively in p53 deficient human tumor cells // Science. - 1996. - Vol. 274. - P. 373-376.
- Chang F., Syrjanen S., Syrjanen K. Implications of p53 tumor suppressor gene in clinical oncology // J. Clin. Oncol. - 1995. - Vol. 13. - P. 1009-1012.
- Graham F. L., Smiley J., Russell W. S., Nairn R. Characteristics of humamn cell line transformed by DNA from human adenovirus type 5 // J. Gen. Virol. - 1977. - Vol. 36. - P. 59-74.
- Heise C., Simpson-Johannes A., Williams A. et al. Onix-015, an El В gene-attenuated adenovirus, causes tumor-specific cytolysis and antitumoral efficacy that can be augemented by standard chemotherapeutic agents // Nature Med. - 1997. - Vol. 3. - P. 639-644.
- Hollstein M., Sidransky D., Vogelstein В., Harris С. С. p53 mutations in human cancers // Science. - 1991. - Vol. 253. - P. 49-53.
- Lubin R., Zalcman G., Bouchet L. et al. Serum p53 antibodies as early markers of lung cancer // Nature Med. - 1995. - Vol. 1- P. 701-702.
- Nemunaitis J., Ganly I., Khuri F. et al. Selective replication and oncolysis in p53 mutant tum;ors with ONYX-015, and E1B55kD gene-deleted adenovirus, in patients with advanced head and neck cancer: a phase II trial // Cancer Res. - 2000. - Vol. 60. - P. 6359-6366.
- Rheinwatd J., Green H. Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells // Cell. - 1975. - Vol. 6. - P. 331-343.
- Sambrook J., Fritsch E. F., Maniatis T. Molecular cloning. A laboratory manual. - 2-nd Ed. - Cold Spring Harbor, 1989. - Vol. 3. - P. 16.41-16.47
Дополнительные файлы
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).