Отправить статью по E-mail Особенности репликации вируса африканской чумы свиней в присутствии рекомбинантных белков CD2v, pX69R и pE248R
- Авторы: Мазлум А.1, Жуков И.Ю.1, Аронова Е.В.1, Иголкин А.С.1, Власова Н.Н.1
-
Учреждения:
- «ВНИИЗЖ» федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных»
- Выпуск: Том 64, № 4 (2019)
- Страницы: 193-200
- Раздел: ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
- Дата подачи: 17.12.2019
- Дата принятия к публикации: 17.12.2019
- Дата публикации: 20.08.2019
- URL: https://virusjour.crie.ru/jour/article/view/9
- DOI: https://doi.org/10.36233/0507-4088-2019-64-4-193-200
- ID: 9
Цитировать
Полный текст
Аннотация
Введение. Африканская чума свиней (АЧС) является особо опасной геморрагической болезнью свиней, которую вызывает крупный ДНК-содержащий вирус семейства Asfaviridae). Поскольку нет эффективных и безопасных вакцин против АЧС, актуально изучение функций белков вируса путём анализа особенностей репликации вируса АЧС в присутствии рекомбинантных белков in vitro.
Цель - изучить функции и степень влияния CD2v, pE248R и pX69R на скорость и уровень репродукции вируса АЧС in vitro для разработки подходов к созданию вакцины против АЧС.
Материал и методы. Использовали вирус АЧС изолят Krasnodar 07/17 и штамм АЧС/ВНИИЗЖ/CV-I. Гены X69R, EP402R и E248R клонировали в векторе pJET1.2/blunt в клетках Е. coli JM-109. Локализацию рекомбинантных белков в клетках CV-1 изучали в реакции прямой иммунофлюоресценции с использованием ФИТЦ-конъюгата поликлональных антител. Уровень репродукции вируса АЧС оценивали в реакции гемадсорбции и в полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.
Результаты. Сконструированы экспрессирующие рекомбинантные плазмиды pCI-neo/E248R, pCI-neo/EP402R и pCl-neo/X69R. Определена локализация и подтверждена специфичность полученных белков CD2v, pE248R и pX69R, для которых установлено, что они повышают уровень накопления вируса АЧС на 3-5-е сутки эксперимента на ~1,2-1,5 1дГАдЕ50/см3 по сравнению с отрицательным контролем.
Обсуждение. В результате анализа установлена важная роль белков CD2v, pX69R и pE248R в репродукции вируса, поскольку они влияют на её уровень. Функция белка pX69R неизвестна, однако в проведённых экспериментах определено его влияние на репродукцию вируса АЧС, проявившееся в увеличении уровня его накопления. Заключение. Данная методология позволяет изучить характер влияния белков с неизвестной функцией на репликацию вируса АЧС.
Об авторах
А. Мазлум
«ВНИИЗЖ» федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных»
Автор, ответственный за переписку.
Email: ali.mazloum6@gmail.com
ORCID iD: 0000-0002-5982-8393
Мазлум Али - кандидат биологических наук, ведущий ветеринарный врач, ФГБУ «ВНИИЗЖ».
600901, Владимирская область, Владимир, микрорайон Юрьевец.
РоссияИ. Ю. Жуков
«ВНИИЗЖ» федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных»
Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-3817-2129
600901, Владимирская область, Владимир, микрорайон Юрьевец.
РоссияЕ. В. Аронова
«ВНИИЗЖ» федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных»
Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-2072-6701
600901, Владимирская область, Владимир, микрорайон Юрьевец.
РоссияА. С. Иголкин
«ВНИИЗЖ» федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных»
Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0002-5438-8026
600901, Владимирская область, Владимир, микрорайон Юрьевец.
РоссияН. Н. Власова
«ВНИИЗЖ» федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных»
Email: fake@neicon.ru
ORCID iD: 0000-0001-8707-7710
600901, Владимирская область, Владимир, микрорайон Юрьевец.
РоссияСписок литературы
- Garner G., Saville P., Fediavsky A., eds. African swine fever. Available at: http://lrd.spc.int/ext/Disease_Manual_Final/a120african_swine_fever.html
- Rowlands R.J., Michaud V., Heath L., Hutchings G., Oura C., Vosloo W., et al. African swine fever virus isolate, Georgia, 2007. Emerg. Infect. Dis. 2008; 14(12): 1870-4. Doi: https://doi.org/10.3201/eid1412.080591
- Gallardo C., Nieto R., Soler A., Pelayo V., Fernandez-Pinero J., Markowska-Daniel I., et al. Assessment of African swine fever diagnostic techniques as a response to the epidemic outbreaks in Eastern European Union Countries: How to improve surveillance and control programs. J. Clin. Microbiol. 2015; 53(8): 2555-65. Doi: https://doi.org/10.1128/JCM.00857-15
- EFSA Panel on Animal Health and Welfare (AHAW). African swine fever virus. EFSA J. 2015; 13(7): 4163-92. Doi: https://doi.org/10.2903/j.efsa.2015.4163
- World Organisation for Animal Health (OIE). African swine fever in Moldova. Immediate notification report. REF OIE: 21095. Available at: http://www.oie.int/wahis_2/temp/reports/en_imm_0000021095_20161004_170450.pdf
- OIE, 2017. World Animal Health Information Disease (WAHID). Paris, France: World Organisation of Animal Health.
- OIE, 2018. World Animal Health Information Disease (WAHID). Paris, France: World Organisation of Animal Health.
- World Organisation for Animal Health. African swine fever in Cote d’Ivoire. Immediate notification report. REF OIE: 15914. Available at: http://www.oie.int/wahis_2/temp/reports/en_imm_0000015914_20140828_131035.pdf
- Болгова М.В., Балышев В.М., Пономарев В.Н., Неверовская Н.С. Паспортизация изолята «Девис» вируса африканской чумы свиней. В кн.: Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы контроля инфекционных болезней животных». Часть 1. Покров; 2014: 43-7.
- Galindo I., Hernaez B., Diaz-Gil G., Escribano J.M., Alonso C. A179L, a viral Bcl-2 homologue, targets the core Bcl-2 apoptotic machinery and its upstream BH3 activators with selective binding restrictions for Bid and Noxa. Virology. 2008; 375(2): 561-72. Doi: https://doi.org/10.1016/j.virol.2008.01.050
- Rodriguez J.M., Yanez R.J., Almazan F., Vinuela E., Rodriguez J.F. African swine fever virus encodes a CD2 homolog responsible for the adhesion of erythrocytes to infected cells. J. Virol. 1993; 67(9): 5312-20.
- Galindo I., Almazan F., Bustos M.J., Vinuela E., Carrascosa A.L. African swine fever virus EP153R open reading frame encodes a glycoprotein involved in the hemadsorption of infected cells. Virology. 2000; 266(2): 340-51. Doi: https://doi.org/10.1006/viro.1999.0080
- Rowlands R.J., Duarte M.M., Boinas F., Hutchings G., Dixon L.K. The CD2v protein enhances African swine fever virus replication in the tick vector, Ornithodoros erraticus. Virology. 2009; 393(2): 319¬28. Doi: https://doi.org/10.1016/j.virol.2009.07.040
- Rodriguez I., Nogal M.L., Redrejo-Rodriguez M., Bustos M.J., Salas M.L. The African swine fever virus virion membrane protein pE248R is required for virus infectivity and an early postentry event. J. Virol. 2009; 83(23): 12290-300. Doi: https://doi.org/10.1128/JVI.01333-09
- Xiang Z., Mobley H.L.T. Vaxign: the first web-based vaccine design program for reverse vaccinology and applications for vaccine development. J. Biomed. Biotechnol. 2010; 2010: 297505. Doi: https://doi.org/10.1155/2010/297505
- Xiang Z., He Y. Genome-wide prediction of vaccine targets for humanherpes simplex viruses using Vaxign reverse vaccinology. BMC Bioinformatics. 2013; 14(Suppl. 4): S2. Doi: https://doi.org/10.1186/1471-2105-14-S4-S2
- Мазлум А., Зиняков Н.Г., Иголкин А.С., Власова Н.Н. Клонирование генов, кодирующих трансмембранные белки и белки, ответственные за вирулентность вируса африканской чумы свиней. Ветеринария сегодня. 2018; (2): 3-7. Doi: https://doi.org/10.29326/2304-196X-2018-2-25-3-7
- Sambrook J., Russell D.W. The Condensed Protocols from Molecular Cloning: a Laboratory Manual. New York: Cold Spring Harbor; 2006.
- Burgess R.R. Elution of proteins from gels.MethodsEnzymol. 2009; 463: 565-72. Doi: https://doi.org/10.1016/S0076-6879(09)63032-9
- Мазлум А., Шарыпова Д.В., Гаврилова В.Л. и др. Методические рекомендации по выделению и титрованию вируса африканской чумы свиней в культуре клеток селезёнки свиней. Владимир; 2019.
- Мазлум А. и др. Методические рекомендации по оценке уровня репродукцию вируса африканской чумы свиней с использованием полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Владимир; 2019.
- Мазлум А., Жуков И.Ю., Першин А.С., Иголкин А.С., Власова Н.Н. Влияние рекомбинантного белка p30 на репродукцию вируса африканской чумы свиней in vitro. Ветеринария сегодня. 2018; (3): 3-7. Doi: https://doi.org/10.29326/2304-196X-2018-3-26-3-7
- Мазлум А., Власова Н.Н., Аронова Е.В., Иголкин А.С., Кривонос Р.А., Черных О.Ю. Определение корреляции показателя Ct и титра вируса африканской чумы свиней в биологических жидкостях. Ветеринария Кубани. 2018; 24(6): 4-7.
- Власова Н.Н., Жуков И.Ю., Мазлум А., Шарыпова Д.В., Першин А.С., Иголкин А.С. Штамм «АЧС/ВНИИЗЖ/ CV-1» вируса африканской чумы свиней, со сниженной вирулентностью для свиней, для вирусологических, диагностических, молекулярно-генетических и мониторинговых исследований. Патент РФ № 2675535; 2019.
Дополнительные файлы
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).