Ключевая роль Asp16 в протеолизе белка NP вируса гриппа А каспазами в инфицированных клетках


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Установлено, что при апоптозе инфицированных клеток главный нуклеокапсидный белок NP (мол. масса 56 кД) вируса гриппа А человека претерпевает N-концевой протеолиз в позиции Asp16 с образованием продукта aNP (мол. масса 53 кД). Предполагалось, что белок NP вирусов гриппа птиц и животных не подвержен протеолизу, так как имеет Gly16. Для проверки этого предположения получали химерный ген NP вируса гриппа человека, в котором посредством сайтнаправленного мутагенеза Asp16 заменен на Gly, и с помощью метода "обратной генетики" получен мутант вируса гриппа человека A/WSN/33 (H1N1), несущий NP "птичьего типа" с точечной мутацией (Gly16). Обнаружено, что вирус гриппа "человека" с химерным NP/Gly16 "птичьего типа" оказался жизнеспособным, но имел сниженную скорость репродукции по сравнению с диким вирусом. При этом, подобно дикому типу, мутантный вирус вызывал апоптоз клеток на поздних сроках инфекции, однако его белок NP был резистентным к клеточным каспазам и не подвергался протеолизу в инфицированных клетках. Из этих наблюдений следует, что Asp16 в молекуле NP вируса гриппа А человека участвует в регуляции репликации вируса и играет ключевую роль в протеолизе NP клеточными каспазами при апоптозе клеток.

Список литературы

  1. Albo С., Valencia A., Portela A. Identification of an RNA binding region within the N-terminal third of the influenza A virus nucleoprotein // J. Virol. - 1995. - Vol. 69. - P. 3799-3806.
  2. Avalos R. Т., Yu Z., Nayak D. P. Association of influenza virus NP and Ml proteins with cytosceletal elements in influenza virus-infected cells // Ibid. - 1997. - Vol. 71. - P. 2947-2958.
  3. Barcena J., Ochoa M., de la Luna S. et al. Monoclonal antibodies against influenza virus PB2 and NP polypeptides interfere with the initiation step of viral mRNA synthesis in vitro // Ibid. - 1994. - Vol. 68. - P. 6900-6909.
  4. Bean W. J. Correlation of influenza A virus nucleoprotein genes with host species // Virology. - 1984. - Vol. 133. - P. 438- 442.
  5. Beaton A. R., Krug R. M. Transcription antitermination during influenza viral template RNA synthesis requires the nucleocapsid proteins and the absence of a 5' capped end // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1986. - Vol. 83. - P. 6282-6286. 1. 13
  6. Buckler-White A. J., Murphy В. R. Nucleotide sequence analysis of the nucleoprotein gene of an avian and a human influenza virus strain identifies two classes of nucleoproteins // Virology. - 1986. - Vol. 155. - P. 345-355.
  7. Fodor E., Devenish L., Engelhard O. G. et al. Rescue of influenza A virus from recombinant DNA // J. Virol. - 1999. - Vol. 73. - P. 9679-9682.
  8. Gammelin M., Mandler J., Scholtissek C. Two subtypes of nucleoprotein (NP) of influenza A viaises // Virology. - 1989. - Vol. 170. - P. 71-80.
  9. Gorman О. Т., Bean W. J., Kawaoka Y., Webster R. G. Evolution of the nucleocapsid gene of influenza A virus // J. Virol. , - 1990. - Vol. .64. - P. 1487-1497.
  10. Hirt B. Selective extraction of polyoma DNA from infected mouse cell cultures // J. Mol. Biol. - 1967. - Vol. 26. - P. 365-369.
  11. Honda A., Veda K., Nagata K., Ishihama A. RNA polymerase of influenza virus: role of NP in RNA chain elongation // J. Biochem. - 1988. - Vol. 104. - P. 1021-1026.
  12. Klenk H. D., Rott R., Orlich M., Blodorn J. Activation of influenza A viruses by trypsin treatment // Virology. - 1975. - Vol. 68. - P. 426-439.
  13. Kobayashi M., Toyoda Т., Adyshev D. M. et al. Molecular dissection of influenza virus nucleoprotein: deletion mapping of the RNA binding-domain // J. Virol. - 1994. - Vol. 68. P. 8433-8436.
  14. Kyhse-Anderson J. Electroblotting of multiple gels: a simple apparatus without buffer tank for rapid transfer of proteins from polyacrylamide to nitrocellulose // J. Biochem. Biophys. Meth. - 1984. - Vol. 10. - P. 203-209.
  15. Lazarowitz.S. G., Choppin P. W. Enhancement of the infectivity of influenza A and В viruses by proteolytic cleavage of the hemagglutinin polypeptide // Virology. - 1975. - Vol. 68. - p. 440-454.
  16. McCauley J., Mahy B. W. J. Structure and function of influenza virus genome // Biochem. J. - 1985. - Vol. 211. - P. 281-294.
  17. Momose F., Busier C. F., O'Neill R. E. et al. Cellular splicing factor RAF-2p48/NPI-5/BATl/UAP56 interacts with the influenza virus nucleoprotein and enhances viral RNA synthesis // J. Virol. - 2001. - Vol. 75. - P. 1899-1908.
  18. Neumann G., Castrucci M. R., Kawaoka Y. Nuclear import and export of influenza virus nucleoprotein // Ibid. - 1997. - Vol. 71. - P. 9690-9700.
  19. Neumann G., Watanabe Т., Ito H. et al. Generation of influenza A viruses entirely from cloned cDNAs // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1999. - Vol. 96. - P. 9345-9350.
  20. Sanger F., Nicklen S., Coulson A. DNA sequencing with chainterminating inhibitors // Ibid. - 1977. - Vol. 74. - P. 5463- 5467.
  21. Schulze I. The structure of influenza virus. 2. A model based on the morphology and composition of subviral particles // Virology. - 1972. - Vol. 47. - P. 181-196.
  22. Shapiro G. L., Krug R. M. Influenza virus RNA replication in vitro: synthesis of viral template RNAs and virion RNAs in the absence of an added primer // J. Virol. - 1988. - Vol. 62. - P. 2285-2290.
  23. Stennicke H. R., Salvesen G. S. Caspases-controlling intracellular signals by protease zymogene activation // Biochim. Biophys. Acta. - 2000. - Vol. 1477. - P. 299-306.
  24. Talanian R. V., Quintan C., Trautz S. et al. Substrate specificity of caspase family proteases // J. Biol. Chem. - 1997. - Vol. 272. - P. 9677-9682.
  25. Tian S. F., Buckler-White A. J., London W. T. et al. Nucleoprotein and membrane protein genes are associated with restriction of replication of influenza A/Mallard/NY/78 virus and its reassortants in squirrel monkey respiratory tract // J. Virol. - 1985. -Vol.53. -P. 771-775.
  26. Wang P., Palese P., O'Neill R. E. The NPI-l/NPI-3 (karyopherin a) binding site on the influenza A virus nucleoprotein NP is a nonconventional nuclear localization signal // Ibid. - 1997. - Vol. 71. - P. 1850-1856.
  27. Zhirnov O. P., Bukrinskaya A. G. Two forms of influenza virus nucleoprotein in infected cells and virions // Virology. - 1981. -Vol. 109. - P. 174-179.
  28. Zhirnov O. P., Ovcharenko A. V., Bukrunskaya A. G. A modified plaque assay method for accurate analysis of infectivity of influenza viruses with uncleaved hemagglutinin // Arch. Virol. - 1982.-Vol. 71. - P. 177-183.
  29. Zhirnov O. P., Bukrinskaya A. G. Nucleoprotein of animal influenza viruses, in contrast to those of human strains, are not cleaved in infected cells // J. Gen. Virol. - 1984. - Vol. 65. - P. 1127-1134.
  30. Zhirnov O. P. The host origin of influenza viruses can be assessed by the intracellular cleavage of the viral nucleocapsid protein // Arch. Virol. - 1988. - Vol. 99. - P. 277-284.
  31. Zhirnov O. P., Konakova T. E., Garten W., Klenk H. D. Caspase-dependent N-terminal cleavage of influenza virus nucleocapsid protein in infected cells // J. Virol. - 1999. - Vol. 73. - P. 10158-10163.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© Жирнов О.П., Воробьева И.В., Веселовский Е.М., Klenk H., 2003

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ПИ № ФС77-77676 от 29.01.2020.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах