Background. Bats are a natural reservoir for various viruses, including SARS-CoV-2. Bat cell cultures are used to study the cellular tropism of zoonotic viruses, which helps determine the range of hosts and their possible origin.
The aim of the study is to assess the sensitivity of the bat kidney cell primary culture of Murina hilgendorfi to infection by different genetic variants of SARS-CoV-2.
Materials and methods. To study the tropism of coronaviruses, a primary culture of M. hilgendorfi bat kidney cells was prepared and infected with strains of different SARS-CoV-2 genetic variants from the Collection of Pathogenic Microorganisms of the G.P. Somov Research Institute of Epidemiology and Microbiology of Rospotrebnadzor (Wuhan, Delta, and Omicron). Vero-E6 cells were used as a positive control. The effectiveness of viral replication was assessed in dynamics by cytopathogenic effect (CPE) and RT-qPCR in the supernatants of cell cultures, with determination of the threshold cycle (Ct).
Results and discussion. On the 7th day cultivation of the primary culture of the bat kidney cells, a heterogeneous monolayer of cells with 70–80% confluency was formed. The monolayer was represented by fibroblast-like and epithelial-like cells. After infecting a culture of bat kidney cells with different SARS-CoV-2 genetic variants, the virus’s CPE was already evident at the initial time points and increased over the period of observation. SARS-CoV-2 RNA was detected in the supernatant of bat kidney cell lysate on the 2nd day after infection, by the 6th day, the Ct values in RT-qPCR decreased for all three genetic variants. This indicates that coronaviruses replicate in bat kidney cells. The reproduction of coronaviruses in the kidney cells of M. hilgendorfi indicates the possibility of virus carriage by representatives of this species, as well as their potential participation in the epidemic process as carriers of viruses. This, in turn, allows us to talk about the role of bats in the formation of natural reservoirs of coronavirus infection.
Conclusions. The primary culture of kidney cells of M. hilgendorfi was obtained for the first time. This culture is susceptible to strains of different SARS-CoV-2 genetic variants (Wuhan, Delta, and Omicron), as confirmed by CPE and RT-qPCR. According to the results of the RT-qPCR analysis, no differences in sensitivity were observed between the three genetic variants.
Введение. Рукокрылые являются природным резервуаром различных вирусов, в том числе коронавируса SARS-CoV-2. Культуры клеток летучих мышей используют для исследования клеточного тропизма зоонозных вирусов, что помогает определить круг хозяев и их возможное происхождение.
Цель работы – изучение чувствительности первичной культуры клеток почек сибирского трубконоса (Murina hilgendorfi) к заражению штаммами SARS-CoV-2 разных геновариантов.
Материалы и методы. Для изучения тропизма коронавирусов была приготовлена первичная культура клеток почек M. hilgendorfi, которую заражали штаммами разных геновариантов SARS-CoV-2 из Коллекции патогенных микроорганизмов НИИЭМ им. Г.П. Сомова Роспотребнадзора (Wuhan, Delta и Omicron). В качестве положительного контроля использовали клетки Vero-Е6. Эффективность репликации вирусов оценивали в динамике по цитопатогенному действию (ЦПД) и по содержанию РНК вирусов методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с обратной транскрипцией в режиме реального времени (ОТ-ПЦР-РВ) с оценкой порогового числа циклов ПЦР (Ct).
Результаты и обсуждение. При культивировании первичной культуры клеток почек M. hilgendorfi на 7-е сутки формировался гетерогенный монослой клеток почек с 70–80% конфлюэнтностью, представленный фибробластоподобными и эпителиоподобными клетками. После заражения культуры клеток почек штаммами разных геновариантов SARS-CoV-2 ЦПД вируса проявлялось уже в начальные сроки и усиливалось в динамике наблюдения. В супернатанте клеточного лизата почек летучих мышей на 2-е сутки после инфицирования была обнаружена РНК SARS-CoV-2. К 6-м суткам показатели Ct в ОТ-ПЦР-РВ снижались для всех трех геновариантов, что свидетельствует о репликации коронавирусов на клетках почек летучих мышей. Репродукция коронавирусов в клетках летучих мышей M. hilgendorfi свидетельствовала о возможности вирусоносительства представителями данного вида, а также об их потенциальном участии в эпидемическом процессе в качестве переносчиков вирусов. Это, в свою очередь, позволяет говорить о роли летучих мышей в формировании природных резервуаров коронавирусной инфекции.
Выводы. Получена первичная культура клеток почек летучих мышей M. hilgendorfi, чувствительная к штаммам разных геновариантов SARS-CoV-2 (Wuhan-подобный, Delta и Omicron), что подтверждается по ЦПД и ОТ-ПЦР-РВ. По результатам ОТ-ПЦР-РВ-анализа различий в чувствительности между 3 геновариантами не выявлено.