Problems of VirologyProblems of VirologyВопросы вирусологии0507-40882411-2097Central Research Institute for Epidemiology1687310.36233/0507-4088-378pevzznTO VIROLOGIST’S AIDВ ПОМОЩЬ ВИРУСОЛОГУResearch ArticleImmunochromatographic analysis of canine parvovirus (Parvoviridae: Protoparvovirus)Иммунохроматографический анализ парвовируса собак (Parvoviridae: Protoparvovirus)https://orcid.org/0000-0002-8602-6599VarlamovNikolay E.ВарламовНиколай Евгеньевич
Russian Federation

Researcher, Laboratory of Biocollection and Antibody-Based Preparations

научный сотрудник лаборатории биоколлекции и препаратов на основе антител

n.varlamov@ronc.ruhttps://orcid.org/0009-0000-2292-8537RyzhikovMikhail A.РыжиковМихаил Александрович
Russian Federation

Laborant Researcher, Laboratory of Biocollection and Antibody-Based Preparations; Postgraduate Student

лаборант-исследователь лаборатории биоколлекции и препаратов на основе антител; аспирант

m.ryzhikov@ronc.ruhttps://orcid.org/0009-0003-7210-2882SerebryakovaNatalya Y.СеребряковаНаталья Юрьевна
Russian Federation

Researcher, Laboratory of Biocollection and Antibody-Based Preparations

научный сотрудник лаборатории биоколлекции и препаратов на основе антител

n.serebrjakova@ronc.ruhttps://orcid.org/0000-0003-0218-8265GusevDmitriy V.ГусевДмитрий Васильевич
Russian Federation

Cand. Sci. (Chem.), Head of the Laboratory of Chemical Synthesis

канд. хим. наук, заведующий лабораторией химического синтеза

d.gusev@ronc.ruhttps://orcid.org/0009-0009-7115-7797SadovskayaYana O.СадовскаяЯна Олеговна
Russian Federation

Junior Researcher, Laboratory of Biocollection and Antibody-Based Preparations

младший научный сотрудник лаборатории биоколлекции и препаратов на основе антител

ja.sadovskaja@ronc.ruhttps://orcid.org/0009-0008-6104-5233KhotulevaMargarita G.ХотулеваМаргарита Геннадьевна
Russian Federation

Laborant Researcher, Laboratory of Biocollection and Antibody-Based Preparations

лаборант-исследователь лаборатории биоколлекции и препаратов на основе антител

m.khotuleva@ronc.ruhttps://orcid.org/0009-0000-0317-9948KarimovaAnastasia O.КаримоваАнастасия Олеговна
Russian Federation

Junior Researcher, Laboratory of Biocollection and Antibody-Based Preparations; Postgraduate Student

младший научный сотрудник лаборатории биоколлекции и препаратов на основе антител; аспирант

a.karimova@ronc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-5465-6094SolopovaOlga N.СолоповаОльга Николаевна
Russian Federation

Cand. Sci. (Biol.), Head of the Laboratory of Biocollection and Antibody-Based Preparations

канд. биол. наук, заведующая лабораторией биоколлекции и препаратов на основе антител

o.solopova@ronc.ruhttps://orcid.org/0000-0003-1403-8520IvanovPavel K.ИвановПавел Константинович
Russian Federation

D. Sci. (Med.), Leading Researcher, Laboratory of Biocollection and Antibody-Based Preparations

д-р мед. наук, ведущий научный сотрудник лаборатории биоколлекции и препаратов на основе антител

p.ivanov@ronc.ruN.N. Blokhin National Medical Research Center of OncologyФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава РоссииNational Research University Higher School of EconomicsФГАОУ ВО «Национальный исследовательский университет «Высшая школа экономики»3006202671328429531032026Copyright ©; 2026, Varlamov N.E., Ryzhikov M.A., Serebryakova N.Y., Gusev D.V., Sadovskaya Y.O., Khotuleva M.G., Karimova A.O., Solopova O.N., Ivanov P.K.Copyright ©; 2026, Варламов Н.Е., Рыжиков М.А., Серебрякова Н.Ю., Гусев Д.В., Садовская Я.О., Хотулева М.Г., Каримова А.О., Солопова О.Н., Иванов П.К.2026Varlamov N.E., Ryzhikov M.A., Serebryakova N.Y., Gusev D.V., Sadovskaya Y.O., Khotuleva M.G., Karimova A.O., Solopova O.N., Ivanov P.K.Варламов Н.Е., Рыжиков М.А., Серебрякова Н.Ю., Гусев Д.В., Садовская Я.О., Хотулева М.Г., Каримова А.О., Солопова О.Н., Иванов П.К.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://virusjour.crie.ru/jour/article/view/16873

Introduction. Infection of canids with canine parvovirus (CPV), especially in puppies, leads to serious damage to the gastrointestinal tract in a short period of time, up to a fatal outcome. In this regard, early and rapid diagnosis is crucial for initiating therapy and preventing the spread of infection. In this connection, immunochromatographic analysis (ICA) is the preferred method because it allows rapid detection of virus infection. In addition, this method is highly specific and does not require complex laboratory equipment, which greatly simplifies its use in comparison with other common methods for detecting canine parvovirus.

The aim of this study is the development of an ICA test system for the detection of the VP2 protein of canine parvovirus.

Materials and methods. Monoclonal antibodies to the recombinant VP2 protein of canine parvovirus were obtained using hybridomic technology. Colloidal gold is synthesized by the citrate method.

Results. Monoclonal antibodies (MABs) against the VP2 protein of canine parvovirus were obtained and characterized, colloidal gold (AuNPs) was synthesized, the conditions for conjugation of MABs with AuNPs were selected, and the optimal ratios of the components of the test system were determined. The visual limit detection (vLOD) was 1.56 ng/mL. The developed ICA test system has shown high diagnostic efficiency in model experiments with a known concentration of VP2, as well as in sick animals with a confirmed diagnosis.

Conclusion. An ICA test system has been developed to determine the VP2 protein of canine parvovirus. The resulting test system can be used as a fast and effective diagnostic tool for detecting CVP in the canine clinical specimens.

Введение. Инфицирование псовых собачьим парвовирусом (CPV), в особенности у щенков, приводит к серьезным повреждениям желудочно-кишечного тракта за короткий промежуток времени, вплоть до летального исхода. В связи с этим ранняя и быстрая диагностика имеет решающее значение для начала терапии и предупреждения распространения инфекции. В этом отношении иммунохроматографический анализ (ИХА) является предпочтительным методом, поскольку позволяет оперативно выявить инфицирование вирусом. Кроме того, этот метод отличается высокой специфичностью и не требует сложного лабораторного оборудования, что значимо упрощает его применение в сравнении с другими распространенными методами обнаружения парвовируса собак.

Цель работы. Разработка ИХА-тест-системы для определения белка VP2 собачьего парвовируса.

Материалы и методы. Методом гибридомной технологии получены моноклональные антитела (МкАТ) к рекомбинантному белку VP2 парвовируса собак. Коллоидное золото (КЗ) синтезировано цитратным методом.

Результаты. Были получены и охарактеризованы МкАТ против белка VP2 парвовируса собак, синтезировано КЗ, подобраны условия конъюгации МкАТ с КЗ, а также определены оптимальные соотношения компонентов тест-системы. Был выявлен наблюдаемый предел обнаружения (vLOD), который составил 1,56 нг/мл. Разработанная ИХА-тест-система показала высокую диагностическую эффективность в модельных экспериментах с известной концентрацией VP2, а также у больных животных с подтвержденным диагнозом.

Заключение. Разработана ИХА-тест-система для определения белка VP2 парвовируса собак. Полученная тест-система может быть использована в качестве быстрого и эффективного диагностического средства для выявления CVP в клиническом материале собак.

ICA test systemtest stripscanine parvovirus (CPV)monoclonal antibodies (MABs)colloidal gold (AuNPs)ИХА-тест-систематест-полоскипарвовирус собак (CPV)моноклональные антитела (МкАТ)коллоидное золото (КЗ)Applegen LLCООО «Эпплген»The study was funded by Applegen, the manufacturer of the ICA QBQVET testsИсследование выполнено за счет средств производителя ИХА-тестов QBQVET компании «Эпплген»Mazzaferro E.M. Update on canine parvoviral enteritis. Vet. Clin. North Am. Small Anim. Pract. 2020; 50(6): 1307–25. https://doi.org/10.1016/j.cvsm.2020.07.008Chander V., Chakravarti S., Gupta V., Nandi S., Singh M., Badasara S.K., et al. Multiplex Amplification Refractory Mutation System PCR (ARMS-PCR) provides sequencing independent typing of canine parvovirus. Infect. Genet. Evol. 2016; 46: 59–64. https://doi.org/10.1016/j.meegid.2016.10.024Tuteja D., Banu K., Mondal B. Canine parvovirology – a brief updated review on structural biology, occurrence, pathogenesis, clinical diagnosis, treatment and prevention. Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 2022; 82: 101765. https://doi.org/10.1016/j.cimid.2022.101765 https://elibrary.ru/wxvxpjGalkina T.S., Globenko L.A. Epizootic situation of parvovirus enteritis in dogs in Vladimir. Veterinarnaya patologiya. 2007; (3): 51–5. https://elibrary.ru/ofmzmv (in Russian)Галкина Т.С., Глобенко Л.А. Эпизоотическая ситуация по парвовирусному энтериту у собак в г. Владимире. Ветеринарная патология. 2007; (3): 51–5. https://elibrary.ru/ofmzmvDecaro N., Buonavoglia C. Canine parvovirus – a review of epidemiological and diagnostic aspects, with emphasis on type 2c. Vet. Microbiol. 2012; 155(1): 1–12. https://doi.org/10.1016/j.vetmic.2011.09.007Qi S., Zhao J., Guo D., Sun D. A Mini-review on the epidemiology of canine parvovirus in China. Front. Vet. Sci. 2020; 7: 5. https://doi.org/10.3389/fvets.2020.00005Kapil S., Cooper E., Lamm C., Murray B., Rezabek G., Johnston L. 3rd., et al. Canine parvovirus types 2c and 2b circulating in North American dogs in 2006 and 2007. J. Clin. Microbiol. 2007; 45(12): 4044–7. https://doi.org/10.1128/JCM.01300-07López-Astacio R.A., Adu O.F., Lee H., Hafenstein S.L., Parrish C.R. The structures and functions of parvovirus capsids and missing pieces: the viral DNA and its packaging, asymmetrical features, nonprotein components, and receptor or antibody binding and interactions. J. Virol. 2023; 97(7): e0016123. https://doi.org/10.1128/jvi.00161-23 https://elibrary.ru/wvwmlySun Y.L., Yen C.H., Tu C.F. Visual detection of canine parvovirus based on loop-mediated isothermal amplification combined with enzyme-linked immunosorbent assay and with lateral flow dipstick. J. Vet. Med. Sci. 2014; 76(4): 509–16. https://doi.org/10.1292/jvms.13-0448Navarro C. Detection of canine parvovirus in dogs by means polymerase chain reaction. AJBSR. 2020; 7(6): 540–7. https://doi.org/10.34297/AJBSR.2020.07.001219 https://elibrary.ru/dldwkbTinky S.S., Ambily R., Nair S.R., Mini M. Utility of a rapid immunochromatographic strip test in detecting canine parvovirus infection compared with polymerase chain reaction. Vet. World. 2015; 8(4): 523–6. https://doi.org/10.14202/vetworld.2015.523-526Salmanli E., Tezcan T., Karaoglu T. A novel lateral flow immunochromatographic assay using a recombinant VP2 antigen for total antibody detection of canine parvovirus-2. Anal. Methods. 2024; 16(4): 551–7. https://doi.org/10.1039/d3ay01870a https://elibrary.ru/dajisyZhang C.Q., Wan Y., Shi Z.W., Luo J.C., Li H.Y., Li S.S., et al. Colloidal gold and fluorescent immunochromatographic test strips for canine parvovirus detection. Appl. Microbiol Biotechnol. 2023; 107(15): 4903–15. https://doi.org/10.1007/s00253-023-12604-2 https://elibrary.ru/akfdlsKöhler G., Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature. 1975; 256(5517): 495–7. https://doi.org/10.1038/256495a0Bogacheva N.V., Smirnova D.N., Darmov I.V., Krupina K.A. Method for obtaining nanoparticles of colloid gold with average diameter 25–30 nm. Patent RF № 2644466 C; 2016. (in Russian)Богачева Н.В., Смирнова Д.Н., Дармов И.В., Крупина К.А. Способ получения наночастиц коллоидного золота со средним диаметром 25-30 нм. Патент РФ № 2644466 C2; 2016.Alhammadi M., Yoo J., Sonwal S., Park S.Y., Umapathi R., Oh M.H., et al. A highly sensitive lateral flow immunoassay for the rapid and on-site detection of enrofloxacin in milk. Front. Nutr. 2022; 9: 1036826. https://doi.org/10.3389/fnut.2022.1036826 https://elibrary.ru/bylevuMirica A.C., Stan D., Chelcea I.C., Mihailescu C.M., Ofiteru A., Bocancia-Mateescu L.A. Latest trends in lateral flow immunoassay (LFIA) detection labels and conjugation process. Front. Bioeng. Biotechnol. 2022; 10: 922772. https://doi.org/10.3389/fbioe.2022.922772 https://elibrary.ru/yveggiMartinez-Liu C., Machain-Williams C., Martinez-Acuña N., Lozano-Sepulveda S., Galan-Huerta K., Arellanos-Soto D., et al. Development of a rapid gold nanoparticle-based lateral flow immunoassay for the detection of dengue virus. Biosensors. 2022; 12(7): 495. https://doi.org/10.3390/bios12070495 https://elibrary.ru/hszsgjLou S., Ye J., Li K., Wu A. A gold nanoparticle-based immunochromatographic assay: The influence of nanoparticulate size. Analyst. 2012; 137(5): 1174–81. https://doi.org/10.1039/c2an15844bShahjahan T., Javed B., Sharma V., Tian F. pH and NaCl optimisation to improve the stability of gold and silver nanoparticles’ anti-zearalenone antibody conjugates for immunochromatographic assay. Methods Protoc. 2023; 6(5): 93. https://doi.org/10.3390/mps6050093 https://elibrary.ru/uidjjkKhashayar P., Amoabediny G., Larijani B., Hosseini M., Vanfleteren J. Fabrication and verification of conjugated AuNP-antibody nanoprobe for sensitivity improvement in electrochemical biosensors. Sci. Rep. 2017; 7(1): 16070. https://doi.org/10.1038/s41598-017-12677-wKoczula K.M., Gallotta A. Lateral flow assays. Essays Biochem. 2016; 60(1): 111–20. https://doi.org/10.1042/ebc20150012Duong N.D., Nguyen-Phuoc K.H., Do K.Y., Mai-Hoang T.D., Nguyen N.T., Tran T.L., et al. A protocol for the optimization of lateral flow immunoassay strip development. Biomed. Res. Ther. 2023; 10(1): 5500–8. https://doi.org/10.15419/bmrat.v10i1.788 https://elibrary.ru/lxktcoFeng H., Hu G.Q., Wang H.L., Liang M., Liang H., Guo H., et al. Canine parvovirus VP2 protein expressed in silkworm pupae self-assembles into virus-like particles with high immunogenicity. PLoS One. 2014; 9(1): e79575. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0079575Park J.S., Choi B.K., Vijayachandran L.S., Ayyappan V., Chong C.K., Lee K.S., et al. Immunodetection of Canine Parvovirus (CPV) in clinical samples by polyclonal antisera against CPV-VP2 protein expressed in Esherichia coli as an antigen. J. Virol. Methods. 2007; 146(1-2): 281–7. https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2007.07.021Sharma C., Singh M., Upmanyu V., Chander V., Verma S., Chakrovarty S., et al. Development and evaluation of a gold nanoparticle-based immunochromatographic strip test for the detection of canine parvovirus. Arch. Virol. 2018; 163(9): 2359–68. https://doi.org/10.1007/s00705-018-3846-2 https://elibrary.ru/yhvtjzDesario C., Decaro N., Campolo M., Cavalli A., Cirone F., Elia G., et al. Canine parvovirus infection: Which diagnostic test for virus? J. Virol. Methods. 2005; 126(1-2): 179–85. https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2005.02.006Shima F.K., Gberindyer F.A., Tion M.T., Fagbohun O.A., Omobowale T.O., Nottidge H.O. Diagnostic performance of a rapid immunochromatographic test kit for detecting canine parvovirus infection. Top. Companion Anim. Med. 2021; 45: 100551. https://doi.org/10.1016/j.tcam.2021.100551 https://elibrary.ru/hekupr