Introduction. Influenza A virus is considered a promising vector platform for the creation of recombinant vaccines due to its high immunogenicity and ability to induce a pronounced humoral and cellular immune response.
The aim of the study is to investigate the optimal cultivation parameters for recombinant influenza A virus strains expressing Mycobacterium bovis ESAT-6 and TB10.4 antigens.
Materials and methods. Cultivation conditions for recombinant influenza viruses A/Ast/PR8-NS124-ESAT6 and A/Ast/PR8-NS124-TB10.4, expressing the ESAT6 and TB10.4 proteins of M. bovis, were optimized. The viruses were produced by reverse genetics using an eight-plasmid system. Cultivation was performed in MDCK and Vero cell lines at varying temperatures (30–37 °C), incubation times, and trypsin concentrations.
Results. It was established that maximum infectious and hemagglutinating titers were achieved when cultured in Vero cells at 37 °C for 72 hours. A decrease in temperature to 30–35 °C was accompanied by a decrease in viral replication. The Vero cell line demonstrated higher productivity compared to MDCK. Hemagglutinating activity correlated with the infectious titer. RT-PCR confirmed the stability of genetic inserts in the NS segment of the genome throughout the entire cultivation period. Temperature and cell line type significantly influence the reproduction of recombinant viruses. The advantage of Vero cells is due to their higher virus accumulation rate. The stability of the genetic inserts confirms the reliability of the resulting strains as vector systems.
Conclusion. Optimal conditions for culturing recombinant influenza viruses, ensuring high reproduction rates and genetic stability, have been identified. The results confirm the potential of using influenza vectors for developing tuberculosis vaccines and the feasibility of scaling up their production.
Введение. Вирус гриппа типа А рассматривается как перспективная векторная платформа для создания рекомбинантных вакцин благодаря высокой иммуногенности и способности индуцировать выраженный гуморальный и клеточный иммунный ответ.
Цель работы – исследование оптимальных параметров культивирования рекомбинантных штаммов вируса гриппа типа А, экспрессирующих антигены ESAT-6 и TB10.4 Mycobacterium bovis.
Материалы и методы. Оптимизированы условия культивирования рекомбинантных вирусов гриппа A/Ast/PR8-NS124-ESAT6 и A/Ast/PR8-NS124-TB10.4, экспрессирующих белки ESAT6 и TB10.4 M. bovis. Вирусы получены методом обратной генетики с использованием 8-плазмидной системы. Культивирование проводили в клеточных линиях MDCK и Vero при варьировании температуры (30–37 °С), продолжительности инкубации и концентрации трипсина.
Результаты. Установлено, что максимальные инфекционные и гемагглютинирующие титры достигаются при культивировании в клетках Vero при температуре 37 °С в течение 72 ч культивирования. Снижение температуры до 30–35 °С сопровождалось уменьшением вирусной репродукции. Клеточная линия Vero показала более высокую продуктивность по сравнению с MDCK. Гемагглютинирующая активность коррелировала с инфекционным титром. Методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией подтверждена стабильность генетических вставок в NS-сегменте генома на протяжении всего периода культивирования. Температура и тип клеточной линии оказывали существенное влияние на репродукцию рекомбинантных вирусов. Преимущество клеток Vero связано с более высоким уровнем накопления вируса. Стабильность генетических вставок подтверждает надежность полученных штаммов как векторных систем.
Заключение. Определены оптимальные условия культивирования рекомбинантных вирусов гриппа, обеспечивающие высокий уровень репродукции и генетическую стабильность. Полученные результаты подтверждают перспективность использования гриппозных векторов для разработки вакцин против туберкулеза и возможность масштабирования их производства.