Problems of VirologyProblems of VirologyВопросы вирусологии0507-40882411-2097Central Research Institute for Epidemiology12230ArticlesСтатьиResearch ArticleDevelopment of Diagnostic Test System Based on Fluorescent Polarization Immunoassay Method for Detection of Antibodies to HCV Nucleocapsid ProteinРазработка диагностической тест-системы, основанной на методе поляризационного флюоресцентного иммуноанализа , для выявления антител к нуклеокапсидному белку вируса гепатита С15042013582VOL 58, NO2 (2013)ТОМ 58, №2 (2013)434609062023Copyright ©; 2013, Sharyshev A.A., Bazhenov A.I., Shibnev V.A.Copyright ©; 2013, Шарышев А.А., Баженов А.И., Шибнев В.А.2013Sharyshev A.A., Bazhenov A.I., Shibnev V.A.Шарышев А.А., Баженов А.И., Шибнев В.А.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://virusjour.crie.ru/jour/article/view/12230

The antigen activity of the synthetic fluorescently labeled peptides, overlapping immunoresponsive epitops a.a. 7-19, 20-34 from N-end part and a.a. 73-85 from the central area of the nucleocapsid protein of C hepatitis virus, was tested using the method of fluorescent polarization immunoassay (FPIA) with 40 samples of the blood serum of patients with viral C hepatitis. A comparative study of analytic characteristics of FPIA method was performed, based on the application of synthesized peptides, as well as of the commercial ELISA test system (BEST anti-HCV-test 4, Vector Best Ltd.). The performed research revealed that the developed method has a high specificity and sensitivity level. The comparability of summary FPIA results with the commercial ELISA test system was 85%, which evidences the prospects of further research in this direction. The principal possibility of the application of the polarization fluorescent immunoassay for the determination of antibodies to the nucleocapsid protein of the C hepatitis virus in clinical serum samples was demonstrated.

При помощи поляризационного флюоресцентного иммуноанализа (ПФИА) изучена антигенная активность синтетических флюоресцентно-меченных пептидов, перекрывающих иммунореактивные участки из аминокислотных остатков (а. о.) 7-19, 20-34 из N-концевой части и а. о. 73-85 из центральной области нуклео-капсидного белка вируса гепатита С (ВГС). На основе данных пептидов разработана ПФИА-тест-система для выявления антител к нуклеокапсидному белку ВГС. Проведено сравнительное изучение аналитических характеристик ПФИА-тест-системы и коммерческой иммуноферментной тест-системы для выявления анти-ВГС. Исследования показали, что разработанный метод обладает 85% чувствительностью и высокой специфичностью относительно тест-системы сравнения. Полученные результаты свидетельствуют O принципиальной возможности применения метода ПФИА для определения антител к нуклеокапсидному белку ВГС в клинических образцах сывороток крови.

HCV virusHCV nucleocapsid proteinepitopssynthetics peptidesfluorescent polarization immunoassayвирус гепатита Снуклеокапсидный белокэпитопысинтетические пептидыметод поляризационного флюоресцентного иммуноанализаChiba J., Ohba H., Matsuura Y. et al. Serodiagnosis of hepatitis С virus (HCV) infection with an HCV core protein molecularly expressed by a recombinant baculovoirus. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991; 88: 4641-5.Dandliker W.B., Feigen G. A. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1961; 5: 29.Ferroni P., Mascolo G., Zaninetti M. et al. Identification of four epitopes in hepatitis С virus core protein. J. Clin. Microbiol. 1993; 31: 1586-91.Goeser Т., Muller H. M., Ye J. et al. Characterization of antigenic determinants in the core antigen of the hepatitis С virus. Virology. 1994; 205: 462-9.Hosein B., Fang С. Т., Popovsky M. A. et al. Improved serodiagnosis of hepatitis С virus infection with synthetic peptide antigen from capsid protein. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991; 88: 3647-51.Houghton M., Weiner A., Han J. et al. Molecular biology of the hepatitis С viruses: implications for diagnosis, development and control of viral disease. Hepatology. 1991; 14: 381-8.Kato N., Hijikata M., Ootsuyama Y. et al. Molecular cloning of the human hepatitis С virus genome from Japanese patients with non-A, non-B hepatitis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990; 87: 9524-28.Katayama Т., Mazda Т., Kikuchi S. et al. Improved serodiagnosis of non-A, non-B hepatitis by an assay detecting antibody to hepatitis С virus core antigen. Hepatology. 1992; 15: 391-94.Lucero N., Escobar G., Ayala S. et al. Fluorescence polarization assay for diagnosis of human brucellosis. J. Med. Microbiol. 2003; 883-7.Nasoff M. S., Zebedee S. L., Inchauspe G. et al. Identification of an immunodominant epitope within the capsid protein of hepatitis С virus. Proc. Natl. Acad. USA. 1991; 88: 5462-6.Sallberg M., Pumpen P., Zhang Z. X. et al. Locations of antibody binding sites within conserved regions of the hepatitis С virus core protein. J. Med. Virol. 1994; 43: 62-8.Stricher F., Martin L., Barthe P. et al. A high-throughput fluorescence polarization assay specific to the CD 4 binding site of HIV-1 Glycoproteins based on a fluorescein-labelled CD4 mimic. Biochem. J. 2005; 390 (Pt1): 29-39.Weber G. Polarization of fluorescence of macromolecules. Biochem. J. 1952; 51: 155-67.Westerfeld J.G. Detection trends in high throughput screening. Anal. Bioanal. Chem. 2002; 372: 43-5.Zaaijer H. L., Vrielink H., van Exel-Oehlers P. J. et al. Confirmation of hepatitis С infection: a comparison of five immunoblot assays. Transfusion. 1994; 34: 603-7.Львов Д. К., Миширо С., Селиванов Н. А. и др. Распространение генотипов вируса гепатита С, циркулирующих на территориях северо-западной и центральной частей России. Вопросы вирусологии. 1995; 6: 251-3.Речкина Е.А., Денисова Г.Ф., Масалова О.В. и др. Картирование антигенных детерминант белков вируса гепатита С при помощи технологии фагового дисплея. Молекулярная биология. 2006; 40 (2): 357-68.Семилетов Ю. А., Фирсова Т. В., Шибнев В. А. и др. Синтез и антигенная активность пептидов из состава core- и NS3-белков вируса гепатита С. Биоорганическая химия. 1993; 19: 126-9.