Problems of VirologyProblems of VirologyВопросы вирусологии0507-40882411-2097Central Research Institute for Epidemiology12080ArticlesСтатьиRestriction analysis of genome composition of live influenza vaccineМетод рестрикционного анализа генома штаммов живой гриппозной вакцины15062011563NO3 (2011)№3 (2011)283209062023Copyright ©; 2011, Kiseleva I.V., Larionova N.V., Teley L.P., Rudenko L.G., Kiseleva I.V., Larionova N.V., Teley L.P., Rudenko L.G.Copyright ©; 2011, Киселева И.В., Ларионова Н.В., Teley L.P., Руденко Л.Г., Kiseleva I.V., Larionova N.V., Teley L.P., Rudenko L.G.2011Kiseleva I.V., Larionova N.V., Teley L.P., Rudenko L.G., Kiseleva I.V., Larionova N.V., Teley L.P., Rudenko L.G.Киселева И.В., Ларионова Н.В., Teley L.P., Руденко Л.Г., Kiseleva I.V., Larionova N.V., Teley L.P., Rudenko L.G.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://virusjour.crie.ru/jour/article/view/12080

Live attenuated cold-adapted influenza vaccine (LIV) has been used in Russia for over 50 years and proved to be safe and effective. Currently, Russian reassortant LAIV is based on influenza A/Leningrad/134/17/57 (H2N2) and B/USSR/60/69 Master Donor Viruses (MDVs) which are cold-adapted (ca), temperature-sensitive (ts), and attenuated (att), respectively. The MDVs are used to generate attenuated reassortant vaccine viruses containing the surface antigens of current wild type (wt) influenza A (H1N1) and A (H3N2) viruses and wt influenza B virus. The ca/ ts/att phenotype of these viruses limits replication in the upper respiratory tract. Reassortment typically yields numerous viruses with different genome constellations, rapid screening is needed to select proper vaccine viruses. In this study, screening of reassortant vaccine strains for live attenuated influenza vaccine generated from currently circulating influenza A and B viruses by RFLP assay is described.

Живая аттенуированная адаптированная к холоду гриппозная вакцина (ЖГВ) применяется в России на протяжении более 50 лет и зарекомендовала себя как безвредная и эффективная. Штаммы современной отечественной ЖГВ представляют собой содержащие поверхностные антигены актуальных вирусов гриппа A (H1N1), A (H3N2) и В реассортанты, подготовленные на основе адаптированных к холоду (ca), термочувствительных (ts) и аттенуированных (att) для человека доноров аттенуации - А/Ленинград/134/17/57 (H2N2) и В/СССР/60/69. Благодаря своему ca/ts/att-фенотипу вакцинные штаммы реплицируются только в верхних отделах респираторного тракта. В процессе реассортации формируется значительное число реассортантов с различным набором генов от донора аттенуации и "дикого" родителя, поэтому для отбора вакцинных штаммов необходим метод быстрой оценки состава их генома. В настоящей работе описан метод ПЦР-рестрикционного геномного анализа вакцинных штаммов ЖГВ, подготовленных на основе современных штаммов вирусов гриппа А и В.

influenza virusesreassortant vaccine strainsRFLP assayвирусы гриппареассортантные вакцинные штаммыПЦР-рестрикционный анализАлександрова Г. И. Применение метода генетической рекомбинации для получения вакцинных штаммов вируса гриппа // Вопр. вирусол. - 1997. - № 4. - С. 387-395.Дешева Ю. А., Руденко Л. Г., Климов А. И. Определение состава генома реассортантных холодоадаптированных штаммов вируса гриппа В методом рестриктазного анализа // Вопр. вирусол. - 2007. - T. 52, № 3. - C. 16-19.Киселева И. В., Климов А. И. Анализ мутаций в геноме холодоадаптированных штаммов вируса гриппа А с использованием расширенной модификации ПЦР-рестрикционного метода // Вопр. вирусол. - 2002. - Т. 47, № 6. - С. 24-26.МУ 3.3.2.1758-03. Методы определения показателей качества иммунобиологических препаратов для профилактики и диагностики гриппа: Метод. указания (http://rudoctor.net/medicine/bz-bw/med-amtuh/index.htm).Brett I., Werber J., Kilbourne E. D. Rapid confirmation by RFLP of transfer to vaccine candidate reassortment viruses of the principal "high yield" gene of influenza A viruses // J. Virol. Meth. - 2002. - Vol. 100. - P. 133-140.Ha S. H., Kim H. A., Kirn Y. H. et al. A multiplex RT-PCR method for screening of reassortant live influenza vaccine virus strains // J. Virol. Meth. - 2006. - Vol. 134. - P. 154-163.He J., Bose M. E., Beck E. T. et al. Rapid multiplex reverse transcription-PCR typing of influenza A and В virus, and subtyping of influenza A virus into HI, 2, 3, 5, 7, 9, N1 human), Nl (animal), N2, and N7, including typing of novel swine origin influenza A (H1N1) virus, during the 2009 outbreak in Milwaukee, Wisconsin // J. Clin. Microbiol. - 2009. - Vol. 47. - P. 2772-2778.Kiseleva I., Voeten J. T. M., Teley L. C. P. et al. PB2 and PA genes control the expression of the temperature sensitive phenotype of cold-adapted B/USSR/60/69 influenza master donor virus // J. Gen. Virol. - 2010. - Vol. 91. - P. 931-937.Klimov A. I., Cox N. J. PCR restriction analysis of genome composition and stability of cold-adapted reassortant live influenza vaccines // J. Virol. Meth. - 1995. - Vol. 52. - P. 41-49.Klimov A. I., Romanova J. R., Egorov A. Y. et al. Nucleotide sequence of the neuraminidase gene of influenza A/Leningrad/ 134/17/57 (H2N2) virus and two its live-attenuated cold-adapted variants // Viral Genes. - 1995. - Vol. 10. - P. 95-98.Odagiri Т., DeBorde D. C., Maassab H. F. Cold-adapted recombinants of influenza A virus in MDCK cells. I. Development and characterization of A/Ann Arbor/6/60 X A/Alaska/6/77 recombinant viruses // Virology. - 1982. - Vol. 119. - P. 82- 95.Odagiri Т., Tosaka A., Ishida N., Maassab H. F. Biological characteristics of a cold-adapted influenza A virus mutation residing on a polymerase gene // Arch. Virol. - 1986. - Vol. 88. - P. 91-104.Offringa D. P., Tyson-Medlock V., Ye Z., Levandovsky R. A. A comprehensive systematic approach to identification of influenza A virus genotype using RT-PCR and RFLP // J. Virol. Meth. - 2000. - Vol. 88. - P. 15-24.Sakamoto S., Kino Y., Oka T. et al. Gene analysis of reassortant influenza virus by RT-PCR followed by restriction enzyme digestion // J. Virol. Meth. - 1996. - Vol. 56. - P. 161-171.Snyder M. H., Betts R. F., DeBorde D. et al. Four viral genes independently contribute to attenuation of live influenza A/Ann Arbor/6/60 (H2N2) cold-adapted reassortant virus vaccines // J. Virol. - 1988. - Vol. 62. - P. 488-495.